foramen Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 saluut 1- Est ce que c'est possible d'obtenir des AC dirigés contre les parties variables d'un AC d'une autre espèce ? 2- Je ne comprends pas pourquoi les réponses sont juste la B et pq DE sont fausses ? merci de vos réponses bonne journée Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 salut @foramen 1- oui je pense que c'est tout à fait possible, c'est ce qu'on fera justement si on veut un sérum spécifiquement dirigé contre un certain type d'Ig, je ne sais pas si c'est ça ta question ? 2- pour les items : B- en effet en rajoutant une séquence d'adressage, par exemple en cours on voit celle de sécrétion, cela va permettre d'obtenir plus facilement la protéine, dans cet exemple là elle serait obtenue de manière sécrétée, donc c'est cool D- si on élue la colonne avec du glutathion alors cela permet d'obtenir tout l'ensemble, c'est à dire la protéine P + GST + la séquence de clivage entre GST et prot P, donc une bande + grande que 120kDa, mais bon pas sure de moi pour le coup mdr E- euhhh jsp du tout mdr vu que @Sashounet écris aussi il te dira sûrement Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
foramen Posted May 5, 2020 Author Share Posted May 5, 2020 merci @VESPA Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 il y a 1 minute, foramen a dit : merci @VESPA de rien, mais franchement la D et la E je sais pas vraiment, il s'agit d'un CCB? la correction détaillée n'est pas fournis ? ah bah non sasha n'écris plus, @Paracelse pourrais tu nous aider pour la D et la E stpp? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
foramen Posted May 5, 2020 Author Share Posted May 5, 2020 @VESPA non c'est une vieille colle et jsp dans la correction ils disent que ya du gluthation qui s'est fixé jsp quoi sur les fragments lors de l'elution donc ça fait des bandes plus grosses Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sashounet Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 Salut !! il y a 13 minutes, foramen a dit : 1- Est ce que c'est possible d'obtenir des AC dirigés contre les parties variables d'un AC d'une autre espèce ? Concrètement je pense que c'est faisaible, mais je ne vois pas l'utilité, car le but c'est de colocaliser donc autant prendre la partie Fc (avec ELISA tu as les 2 parties Fab qui sont dirigées contre un même Ag donc bon franchement je sais pas trop..) il y a 16 minutes, foramen a dit : 2- Je ne comprends pas pourquoi les réponses sont juste la B et pq DE sont fausses ? La B est juste, voilà XD en vrai, on peut rajouter (souvent même) la séquence codant GFP ça permet de voir donc c'est COOL Il faut bien lire l'énoncé, on est dans un cas de protéine recombinée Pour la D, je suis d'accord avec @VESPA Pour la E, L’ajout d’une séquence d’élimination avant l’étiquette (selon le cadre de lecture) permet, sur colonne (l’étiquette, clivée, reste liée à la matrice tandis que la protéine est éluée) ou sur protéine purifiée, de cliver et se débarrasser de l’étiquette et n’obtenir que la protéine fonctionnelle à proprement parler. Tu n'auras qu'une seule bande à 85kDa Voila ce que je pense Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 il y a 1 minute, foramen a dit : ya du gluthation qui s'est fixé jsp quoi bon bah je viens peut être d'apprendre qqch mdr il y a 2 minutes, Sashounet a dit : Concrètement je pense que c'est faisaible, mais je ne vois pas l'utilité si si c'est utile si on veut mettre en évidence uniquement les IgG d'une espèce et pas ces IgM ou IgA etc ... il y a 3 minutes, Sashounet a dit : Pour la E, L’ajout d’une séquence d’élimination avant l’étiquette (selon le cadre de lecture) permet, sur colonne (l’étiquette, clivée, reste liée à la matrice tandis que la protéine est éluée) ou sur protéine purifiée, de cliver et se débarrasser de l’étiquette et n’obtenir que la protéine fonctionnelle à proprement parler. Tu n'auras qu'une seule bande à 85kDa ce que je comprends pas c'est qu'on élue avant, donc GST part avec tout, c'est après qu'on clive Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
foramen Posted May 5, 2020 Author Share Posted May 5, 2020 @VESPA @Sashounet Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 bon bah @foramen, c'est surement pour ça alors ... je n'avais jamais fait attention à cette subtilité, certes le glutathion qui était à la base sur la résine qui permettait de fixer le glutathion va être remplacé par le glutathion qu'on rajoute pour être élué, mais vous savez ce qui relie le glutathion au GST? c'est bien des interaction intermoléculaires faibles non ? et sachant que la technique de SDS PAGE est dénaturante, je pensais que ça les détacheraient, mais à ce que je vois non .. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sashounet Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 Pour moi le gluthation réduit fait compétition à l'étiquette GST pour que les Prot P puissent tombées. "Normalement" on est pas censé avoir cette 2ème ligne, car la phase stationnaire devrait rester sur la colonne. Même au concours et sur le TD la plus gentille des Isabelle ne prend pas en compte la chute du gluthation dans les bandes.. Preuve ici du TD de recherche (QCM 12 item C) il y a 28 minutes, VESPA a dit : ah bah non sasha n'écris plus Je suis là, je veux juste pas dire de bétises ahaha Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
foramen Posted May 5, 2020 Author Share Posted May 5, 2020 @VESPA je pense que c'est pas une subtilité a prendre en compte surtt que c'est un très vieux qcm Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 (edited) @Sashounet, justement le glutathion qui est en quelques sortes "libres", donc celui qu'on ajoute (les petites billes bleues) fait compétition avec le glutathion qui était de base sur la colonne (les petites billes bleues sur les billes grises). il ne va pas faire compétition avec la GST car justement il a une forte affinité pour lui (glutathion = glutathion réduit, c'est pareil), du coup le glutathion qu'on rajoute se fixe sur la GST à la place du glutathion déjà posé et décroche la protéine et on voit bien sur le schéma du TD qu'en effet la protéine qui contient GST tombe avec les petites billes bleues, donc le glutathion qui a été ajouté, cependant lors de la SDS PAGE la prof ne le prend pas en compte et dit que l'on retrouve bien une bande à 95 kDa donc tant mieux à l’instant, foramen a dit : @VESPA je pense que c'est pas une subtilité a prendre en compte surtt que c'est un très vieux qcm oui voilà, je pense qu'on s'en fout ! Edited May 5, 2020 by VESPA Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
foramen Posted May 5, 2020 Author Share Posted May 5, 2020 @Sashounet exactement j'arrivais pas a retrouver ce qcm dont tu parlais ahah Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 il y a 1 minute, foramen a dit : @Sashounet exactement j'arrivais pas a retrouver ce qcm dont tu parlais ahah bref bh du coup je pense que c'est bon hein pour la D et la E ça aurait du être vrai, pck même la séquence de clivage je crois pas qu'on prenne ça en compte ... Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sashounet Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 il y a 1 minute, VESPA a dit : bref bh du coup je pense que c'est bon hein pour la D et la E ça aurait du être vrai, pck même la séquence de clivage je crois pas qu'on prenne ça en compte ... Je vais poser la question à la prof Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 il y a 1 minute, Sashounet a dit : Je vais poser la question à la prof ça marche merci Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Hypnos Posted May 5, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted May 5, 2020 (edited) Salut ! c’est un qcm d’annales si oui, je vous avoue qu’ils ne font pas preuve d’une rigueur des plus extrêmes à chaque fois parfois il faut compter la taille de l’étiquette, parfois non compter le glutathion en plus je trouve ça du foutage de gueule je le dis clairement pour moi, désormais, s’ils veulent qu’on considère l’étiquette, sa taille nous sera précisée dans l’énoncé ou au pire vous faites la technique d’envoyer un petit message pendant le cc à Isa pour lui faire preciser Edited May 5, 2020 by Paracelse Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
foramen Posted May 5, 2020 Author Share Posted May 5, 2020 il y a 1 minute, Paracelse a dit : compter le glutathion en plus je trouve ça du foutage de gueule je le dis clairement mdrr quand j'ai vu la correction j'étais genre Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sashounet Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 il y a 2 minutes, Paracelse a dit : ou au pire vous faites la technique d’envoyer un petit message pendant le cc à Isa pour lui faire preciser Je viens de lui envoyer un mail comme ça on sera fixé Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 5, 2020 Share Posted May 5, 2020 il y a 15 minutes, Paracelse a dit : compter le glutathion en plus je trouve ça du foutage de gueule je le dis clairement j’aurai pas pu le dire plus clairement ... Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Sashounet Posted May 11, 2020 Solution Share Posted May 11, 2020 Je up le sujet pour mettre la réponse de notre Isabelle nationale la plus belle : Bonjour, Concernant l'exercice 12 item C : effectivement le glutathion reste lié à la partie du GST de la protéine GST-R. Le glutathion est une toute petite molécule (3 acides aminés). Lors de la préparation de la fraction éluée pour l'électrophrèse, l'utilisation du SDS va permettre la dissociation du glutathion de la protéine GST-R, la taille sera donc bien de 95kDa. De plus, le glutathion est une molécule formée de 3 acides aminés, ce qui serait négligeable pour pouvoir observer une augmentation de taille si les deux molécules restaient associées. Deuxième question, oui dans nos qcms nous pouvons négliger la masse apportée par ces séquences. Bon courage, continuez de tenir bon. ilm Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 11, 2020 Share Posted May 11, 2020 merci sashouneeet @foramen @Hypnos Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
foramen Posted May 11, 2020 Author Share Posted May 11, 2020 merci @Sashounet Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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