2 items cours Nogueira pack de poly

[Pihounette]

Bonjour !  

 

J'ai deux petites questions concernant ces deux items, venant du pack de poly de Purpan de cette année. 

 

• QCM 7, item C : vrai
  
  
  Je ne comprends pas pourquoi cet item est vrai. On nous dit que l'anticorps Cp réalise un marquage de type cytoplasmique. Comment pourrait-il reconnaître les cellules cancéreuses sans que l'on lyse les cellules ? 
   
• QCM 10, item C : vrai
  
  Je n'arrive pas à trouver le raisonnement permettant de répondre à cet item...  

 

Merci !  

[Metallica]

Salut @Pihounette

 

il y a 19 minutes, Pihounette a dit :

Je ne comprends pas pourquoi cet item est vrai. On nous dit que l'anticorps Cp réalise un marquage de type cytoplasmique. Comment pourrait-il reconnaître les cellules cancéreuses sans que l'on lyse les cellules ? 

 

Pourquoi on ne pourrait pas les lyser ?

une fois qu on a fait notre tri cellulaire, on peut faire notre étude classique de criblage, en solubilisant toutes les proteines des cellules cancéreuses afin d'en obtenir un extrait protéique total, extrait qui pourra faire l'objet d'une étude immunocytochimique ;))

 

il y a 19 minutes, Pihounette a dit :

Je n'arrive pas à trouver le raisonnement permettant de répondre à cet item...

 

En gros le truc c'est de dire que vu que cet Ac est le seul à reconnaître la forme de 100kDa, cela nous oriente vers la réaction croisée. De plus, le fait qu'il reconnaisse une prot de Pm supérieur à celle que tous les Ac reconnaissent, ça infirme l'hypothèse de la forme clivée et donc renforce davantage l'explication selon laquelle, on serait en présence d une réaction croisée.

 

Edited May 3, 2020 by Metallica

[Pihounette]

Déjà, merci beaucoup @Metallica, tu prends toujours je temps de me répondre en recherche

 

il y a 15 minutes, Metallica a dit :

Pourquoi on ne pourrait pas les lyser ?

une fois qu on a fait notre tri cellulaire, on peut faire notre étude classique de criblage, en solubilisant toutes les proteines des cellules cancéreuses afin d'en obtenir un extrait protéique total, extrait qui pourra faire l'objet d'une étude immunocytochimique ;))

Ah d'accord, je pensais que comme l'item ne le précisait pas, ça voulait dire qu'on ne le faisais pas du tout  

 

il y a 16 minutes, Metallica a dit :

En gros le truc c'est de dire que vu que cet Ac est le seul à reconnaître la forme de 100kDa, cela nous oriente vers la réaction croisée. De plus, le fait qu'il reconnaisse une prot de Pm supérieur à celle que tous les Ac reconnaissent, ça infirme l'hypothèse de la forme clivée et donc renforce davantage l'explication selon laquelle, on serait en présence d une réaction croisée.

Oui, je suis d'accord avec toi, mais ce que je ne comprends pas, c'est comment peut-on en déduire que l'Ac reconnaît un épitope sur la partie intracellulaire de la protéine ? 

[Metallica]

Il y a 2 heures, Pihounette a dit :

u prends toujours je temps de me répondre en recherche

 

 

Il y a 2 heures, Pihounette a dit :

Ah d'accord, je pensais que comme l'item ne le précisait pas, ça voulait dire qu'on ne le faisais pas du tout  

 

En fait le terme important c'est "immunocytochimie". On fait une étude à l'échelle moléculaire du coup la lyse de la cellule n'affectera pas l'étude et sera même importante pour pouvoir étudier des protéines qui ne peuvent pas l’être tant que la cellule reste intègre.(il faut faire attention lors de la lyse à ne pas détruire la structure des prots que l'on cherche à étudier c'est pourquoi l'emploi de détergents doux est favorisé ;))

 

Il y a 2 heures, Pihounette a dit :

ui, je suis d'accord avec toi, mais ce que je ne comprends pas, c'est comment peut-on en déduire que l'Ac reconnaît un épitope sur la partie intracellulaire de la protéine ? 

 

Oupsi j'ai regardé sur mon tel et les numérotations des items étaient absentes et j'ai fusionné plusieurs items x).

 

Alors pour la C, tu sais déjà qu'elle reconnait un épi conformationnel( bande en immunoprecipitation/absence en immunotransfert) mais bon ça c'est pas ce qui nous intéresse dans l'absolu. La clé du problème se situe au niveau de la différence entre immunoprécipitation et immunofluorescence sur les cellules. Dans les deux cas on respecte la conformation des protéines et pourtant dans cet exo,l'une d'elle ne produit pas de signal alors que l'autre oui. Dans une immunoprécipitation, tu solubilises toutes tes protéines y compris les protéines membranaires donc tous les épitopes seront accessibles alors que lors d'une immunofluorescence sur des cellules, seules les épitopes directement accessibles seront ciblés par les Ac en l’occurrence il s'agit des protéines membranaires périphériques ou alors de la portion extracellulaire des protéines transmembranaires. Partant de là, s'il y a un signal en immunoprécipitation et rien en immunofluorescence (faite sur les cellules), tu peux en conclure que l'épitope reconnu par l'Ac1 utilisé se situe sur la portion intracellulaire de RRG1

 

 

 

 

Edited May 3, 2020 by Metallica

[Pihounette]

Il y a 1 heure, Metallica a dit :

En fait le terme important c'est "immunocytochimie". On fait une étude à l'échelle moléculaire du coup la lyse de la cellule n'affectera pas l'étude et sera même importante pour pouvoir étudier des protéines qui ne peuvent pas l’être tant que la cellule reste intègre.(il faut faire attention lors de la lyse à ne pas détruire la structure des prots que l'on cherche à étudier c'est pourquoi l'emploi de détergents doux est favorisé ;))

D'accord, merci beaucoup !  

 

Il y a 1 heure, Metallica a dit :

Alors pour la C, tu sais déjà qu'elle reconnait un épi conformationnel( bande en immunoprecipitation/absence en immunotransfert) mais bon ça c'est pas ce qui nous intéresse dans l'absolu. La clé du problème se situe au niveau de la différence entre immunoprécipitation et immunofluorescence sur les cellules. Dans les deux cas on respecte la conformation des protéines et pourtant l'une d'elle ne produit pas de signal alors que l'autre oui. Dans une immunoprécipitation, tu solubilises toutes tes protéines y compris les protéines membranaires donc tous les épitopes seront accessibles alors que lors d'une immunofluorescence sur des cellules, seules les épitopes directement accessibles seront ciblés par les Ac en l’occurrence il s'agit des protéines membranaires périphériques ou alors de la portion extracellulaire des protéines transmembranaires. Partant de là, s'il y a un signal en immunoprécipitation et rien en immunofluorescence (faite sur les cellules), tu peux en conclure que l'épitope reconnu par l'Ac1 utilisé se situe sur la portion intracellulaire de RRG1

Wa tu m'apprends des trucs, je savais pas du tout ^^ Merci infiiiiiiiiiiiiiiiiiniment  

 

 

Il y a 1 heure, Metallica a dit :