Pihounette Posted May 3, 2020 Posted May 3, 2020 Bonjour ! J'ai deux petites questions concernant ces deux items, venant du pack de poly de Purpan de cette année. QCM 7, item C : vrai Je ne comprends pas pourquoi cet item est vrai. On nous dit que l'anticorps Cp réalise un marquage de type cytoplasmique. Comment pourrait-il reconnaître les cellules cancéreuses sans que l'on lyse les cellules ? QCM 10, item C : vrai Je n'arrive pas à trouver le raisonnement permettant de répondre à cet item... Merci ! Quote
Metallica Posted May 3, 2020 Posted May 3, 2020 (edited) Salut @Pihounette On 5/3/2020 at 3:39 PM, Pihounette said: Je ne comprends pas pourquoi cet item est vrai. On nous dit que l'anticorps Cp réalise un marquage de type cytoplasmique. Comment pourrait-il reconnaître les cellules cancéreuses sans que l'on lyse les cellules ? Expand Pourquoi on ne pourrait pas les lyser ? une fois qu on a fait notre tri cellulaire, on peut faire notre étude classique de criblage, en solubilisant toutes les proteines des cellules cancéreuses afin d'en obtenir un extrait protéique total, extrait qui pourra faire l'objet d'une étude immunocytochimique ;)) On 5/3/2020 at 3:39 PM, Pihounette said: Je n'arrive pas à trouver le raisonnement permettant de répondre à cet item... Expand En gros le truc c'est de dire que vu que cet Ac est le seul à reconnaître la forme de 100kDa, cela nous oriente vers la réaction croisée. De plus, le fait qu'il reconnaisse une prot de Pm supérieur à celle que tous les Ac reconnaissent, ça infirme l'hypothèse de la forme clivée et donc renforce davantage l'explication selon laquelle, on serait en présence d une réaction croisée. Edited May 3, 2020 by Metallica Quote
Pihounette Posted May 3, 2020 Author Posted May 3, 2020 Déjà, merci beaucoup @Metallica, tu prends toujours je temps de me répondre en recherche On 5/3/2020 at 3:56 PM, Metallica said: Pourquoi on ne pourrait pas les lyser ? une fois qu on a fait notre tri cellulaire, on peut faire notre étude classique de criblage, en solubilisant toutes les proteines des cellules cancéreuses afin d'en obtenir un extrait protéique total, extrait qui pourra faire l'objet d'une étude immunocytochimique ;)) Expand Ah d'accord, je pensais que comme l'item ne le précisait pas, ça voulait dire qu'on ne le faisais pas du tout On 5/3/2020 at 3:56 PM, Metallica said: En gros le truc c'est de dire que vu que cet Ac est le seul à reconnaître la forme de 100kDa, cela nous oriente vers la réaction croisée. De plus, le fait qu'il reconnaisse une prot de Pm supérieur à celle que tous les Ac reconnaissent, ça infirme l'hypothèse de la forme clivée et donc renforce davantage l'explication selon laquelle, on serait en présence d une réaction croisée. Expand Oui, je suis d'accord avec toi, mais ce que je ne comprends pas, c'est comment peut-on en déduire que l'Ac reconnaît un épitope sur la partie intracellulaire de la protéine ? Quote
Solution Metallica Posted May 3, 2020 Solution Posted May 3, 2020 (edited) On 5/3/2020 at 4:14 PM, Pihounette said: u prends toujours je temps de me répondre en recherche Expand On 5/3/2020 at 4:14 PM, Pihounette said: Ah d'accord, je pensais que comme l'item ne le précisait pas, ça voulait dire qu'on ne le faisais pas du tout Expand En fait le terme important c'est "immunocytochimie". On fait une étude à l'échelle moléculaire du coup la lyse de la cellule n'affectera pas l'étude et sera même importante pour pouvoir étudier des protéines qui ne peuvent pas l’être tant que la cellule reste intègre.(il faut faire attention lors de la lyse à ne pas détruire la structure des prots que l'on cherche à étudier c'est pourquoi l'emploi de détergents doux est favorisé ;)) On 5/3/2020 at 4:14 PM, Pihounette said: ui, je suis d'accord avec toi, mais ce que je ne comprends pas, c'est comment peut-on en déduire que l'Ac reconnaît un épitope sur la partie intracellulaire de la protéine ? Expand Oupsi j'ai regardé sur mon tel et les numérotations des items étaient absentes et j'ai fusionné plusieurs items x). Alors pour la C, tu sais déjà qu'elle reconnait un épi conformationnel( bande en immunoprecipitation/absence en immunotransfert) mais bon ça c'est pas ce qui nous intéresse dans l'absolu. La clé du problème se situe au niveau de la différence entre immunoprécipitation et immunofluorescence sur les cellules. Dans les deux cas on respecte la conformation des protéines et pourtant dans cet exo,l'une d'elle ne produit pas de signal alors que l'autre oui. Dans une immunoprécipitation, tu solubilises toutes tes protéines y compris les protéines membranaires donc tous les épitopes seront accessibles alors que lors d'une immunofluorescence sur des cellules, seules les épitopes directement accessibles seront ciblés par les Ac en l’occurrence il s'agit des protéines membranaires périphériques ou alors de la portion extracellulaire des protéines transmembranaires. Partant de là, s'il y a un signal en immunoprécipitation et rien en immunofluorescence (faite sur les cellules), tu peux en conclure que l'épitope reconnu par l'Ac1 utilisé se situe sur la portion intracellulaire de RRG1 Edited May 3, 2020 by Metallica Quote
Pihounette Posted May 3, 2020 Author Posted May 3, 2020 On 5/3/2020 at 4:50 PM, Metallica said: En fait le terme important c'est "immunocytochimie". On fait une étude à l'échelle moléculaire du coup la lyse de la cellule n'affectera pas l'étude et sera même importante pour pouvoir étudier des protéines qui ne peuvent pas l’être tant que la cellule reste intègre.(il faut faire attention lors de la lyse à ne pas détruire la structure des prots que l'on cherche à étudier c'est pourquoi l'emploi de détergents doux est favorisé ;)) Expand D'accord, merci beaucoup ! On 5/3/2020 at 4:50 PM, Metallica said: Alors pour la C, tu sais déjà qu'elle reconnait un épi conformationnel( bande en immunoprecipitation/absence en immunotransfert) mais bon ça c'est pas ce qui nous intéresse dans l'absolu. La clé du problème se situe au niveau de la différence entre immunoprécipitation et immunofluorescence sur les cellules. Dans les deux cas on respecte la conformation des protéines et pourtant l'une d'elle ne produit pas de signal alors que l'autre oui. Dans une immunoprécipitation, tu solubilises toutes tes protéines y compris les protéines membranaires donc tous les épitopes seront accessibles alors que lors d'une immunofluorescence sur des cellules, seules les épitopes directement accessibles seront ciblés par les Ac en l’occurrence il s'agit des protéines membranaires périphériques ou alors de la portion extracellulaire des protéines transmembranaires. Partant de là, s'il y a un signal en immunoprécipitation et rien en immunofluorescence (faite sur les cellules), tu peux en conclure que l'épitope reconnu par l'Ac1 utilisé se situe sur la portion intracellulaire de RRG1 Expand Wa tu m'apprends des trucs, je savais pas du tout ^^ Merci infiiiiiiiiiiiiiiiiiniment On 5/3/2020 at 4:50 PM, Metallica said: Expand Quote
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