EmmaFerjani Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 Salut! J'ai un petit problème avec cet item du TD d'immunoanalyse 'La quantité de TNF recombinant purifié peut être dosée par cytométrie en flux avec un anticorps anti-TNF de capture couplé à une bille fluorescente dans le rouge et un anticorps anti-TNF de révélation couplé à un fluorochrome vert.' Il a été considéré vrai mais je ne comprends pas pourquoi on a couplé l'anticorps anti-TNF de capture à une bille fluorescente. Pourquoi alors se donner la peine d'ajouter un AC de révélation? (la bille fluorescente va fluorescer, non? Mercii Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aligot Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 Salut @EmmaFerjani ! En fait si tu ne couples pas tes anticorps avec une molécule fluorescente, tu ne pourras pas visualiser les deux populations différentes que tu tries. Certes les anticorps anti TNF vont se fixer sur le TNF, mais après il faut que le cytomètre puisse compter pour trier les deux populations et ça ça ne peut pas se faire si tu n'as pas des molécules fluorescentes. Je sais pas si j'ai répondu à ta question ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
EmmaFerjani Posted May 3, 2020 Author Share Posted May 3, 2020 Hey @Aligot dsl mais quelles 2 populations?? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière PierrickSenior Posted May 3, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted May 3, 2020 il y a 1 minute, EmmaFerjani a dit : dsl mais quelles 2 populations?? Yooop, je pense que part "deux populations" elle voulait dire -> ce qui est du TNF recombinant et -> ce qui n'est pas du TNF recombinant. Ensuite comme on le voit dans les techniques de ELISA et de ELISPOT, l'Ac de capture même couplé à un fluorochrome de suffit pas à la détection et on rajoute tjr un Ac de détection. Le principe est ici le même selon moi. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
EmmaFerjani Posted May 3, 2020 Author Share Posted May 3, 2020 (edited) hey! @PierrickJunior ouii je vois, mais du coup pourquoi utiliser une bille fluo avec cet Ac de capture.. On a bien au départ une population et on veut juste faire fluorescer la population de TNF non? Faire ressortir les TNF parmis touuuuutes les autres molécules du mélange (pour faire simple quoi XD). L'Ac de capture va fixer le TNF et l'Ac de détection va permettre cette detection à l'oeil nu par la fluorescence, si je ne me trompe pas. Je ne vois pas l'utilité de faire briller l'Ac de détection, on sait qu'il est là, c'est nous qui l'avons mis. (j'ai essayé de reformuler ma question pour etre plus claire hahaha @Aligot) Edited May 3, 2020 by EmmaFerjani Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Solution PierrickSenior Posted May 3, 2020 Ancien Responsable Matière Solution Share Posted May 3, 2020 Du coup @EmmaFerjani, dans l'item on nous dit qu'on passe par une cytométrie en flux. Le principe de la cytométrie va être de dosé et trier différentes populations selon leurs fluorescence (je généralise peut être ou fait un gros raccourcit, mais c'est ce qu'on voit en QCM). Maintenant reprenons l'exemple du TNF. Imagine que le TNF qu'on veuille dosé est celui du plasma d'un patient.. Il faut avoir en tête que les concentrations en TNF a ce niveau là sont de l'ordre du pictogramme/L donc, tu te doutes, très dur à détecter. Du coup premièrement, non la fluorescence ne sera très certainement pas visible à l'oeil nu car trop peu de TNF aillant été capturé. Ensuite, l'utilisation de deux AC, un de capture et un détections va permettre de rendre l'expérience fiable et aussi (même surtout eventuellement) reproductible. Donc la fluorescence présente mais pas forcément visible (en tout cas pas à l'oeil nu) va passer dans une cytométrie en flux pour être dosée et triée. Est ce que c'est plus clair pour toi ? Notamment c'est la notion de petite échelle qui nous oblige à faire tout ca. Sinon n'hésite pas. Bonne journée à toi. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
EmmaFerjani Posted May 3, 2020 Author Share Posted May 3, 2020 hey! je vois beaucoup mieux! merciiii Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière PierrickSenior Posted May 3, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted May 3, 2020 à l’instant, EmmaFerjani a dit : hey! je vois beaucoup mieux! merciiii Pas de soucis Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aligot Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 Je me suis trop mal exprimée @EmmaFerjani désolé haha, merci d'être venu à la rescousse mon cher @PierrickJunior Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted May 3, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted May 3, 2020 il y a 18 minutes, PierrickJunior a dit : Du coup @EmmaFerjani, dans l'item on nous dit qu'on passe par une cytométrie en flux. Le principe de la cytométrie va être de dosé et trier différentes populations selon leurs fluorescence (je généralise peut être ou fait un gros raccourcit, mais c'est ce qu'on voit en QCM). Maintenant reprenons l'exemple du TNF. Imagine que le TNF qu'on veuille dosé est celui du plasma d'un patient.. Il faut avoir en tête que les concentrations en TNF a ce niveau là sont de l'ordre du pictogramme/L donc, tu te doutes, très dur à détecter. Du coup premièrement, non la fluorescence ne sera très certainement pas visible à l'oeil nu car trop peu de TNF aillant été capturé. Ensuite, l'utilisation de deux AC, un de capture et un détections va permettre de rendre l'expérience fiable et aussi (même surtout eventuellement) reproductible. Donc la fluorescence présente mais pas forcément visible (en tout cas pas à l'oeil nu) va passer dans une cytométrie en flux pour être dosée et triée. Est ce que c'est plus clair pour toi ? Notamment c'est la notion de petite échelle qui nous oblige à faire tout ca. Sinon n'hésite pas. Bonne journée à toi. Comment tu fais trop le mec, je tiens à précisé à la population qu'il a répondu en caleçon. Redescend pierrick. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 à l’instant, Lami_Molette a dit : Comment tu fais trop le mec, je tiens à précisé à la population qu'il a répondu en caleçon. Redescend pierrick. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
EmmaFerjani Posted May 3, 2020 Author Share Posted May 3, 2020 La recherche ça donne chaud! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted May 3, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted May 3, 2020 il y a 1 minute, EmmaFerjani a dit : La recherche ça donne chaud! Oui. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aligot Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 il y a 5 minutes, Lami_Molette a dit : Comment tu fais trop le mec, je tiens à précisé à la population qu'il a répondu en caleçon. Redescend pierrick. Que veux tu il est à l'aise partout le type Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted May 3, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted May 3, 2020 (edited) à l’instant, Aligot a dit : Que veux tu il est à l'aise partout le type Un peu trop à l'aise parfois.... D'ailleurs @Aligot / @VESPA / @PierrickJunior / @Petit_Bateau / @Chat_du_Cheshire vous trouvez pas qu'on s'emmerde là? J'suis obligé" de bosser mes cours tutoweb est mort, plus aucune question c'est nul de fou... Edited May 3, 2020 by Lami_Molette Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 (edited) il y a 4 minutes, Lami_Molette a dit : Un peu trop à l'aise parfois.... D'ailleurs @Aligot / @VESPA / @PierrickJunior / @Petit_Bateau / @Chat_du_Cheshire vous trouvez pas qu'on s'emmerde là? J'suis obligé" de bosser mes cours tutoweb est mort, plus aucune question c'est nul de fou... mdrr j’ai oublié c’est quoi révisé mes cours donc j’actualise la page toutes les minutes en attente de questions, en vain, je m’en vais réviser pour vous poser des questions, à+ Edited May 3, 2020 by VESPA Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted May 3, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted May 3, 2020 à l’instant, VESPA a dit : J’ai oublié c’est quoi révisé mes cours donc j’actualise la page toutes les minutes en attente de questions, en vain Je ne suis donc pas seul. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aligot Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 il y a 4 minutes, Lami_Molette a dit : D'ailleurs @Aligot / @VESPA / @PierrickJunior / @Petit_Bateau / @Chat_du_Cheshire vous trouvez pas qu'on s'emmerde là? J'suis obligé" de bosser mes cours tutoweb est mort, plus aucune question c'est nul de fou... Mais oui, on peut même plus se battre pour un sujet, moi je dis ça sent la retraite pour nous il y a 2 minutes, VESPA a dit : je m’en vais réviser pour vous posez des questions, à+ Je compte les minutes Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 il y a 1 minute, Lami_Molette a dit : Je ne suis donc pas seul. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted May 3, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted May 3, 2020 il y a 2 minutes, Aligot a dit : Mais oui, on peut même plus se battre pour un sujet, moi je dis ça sent la retraite pour nous RTT engagé, profitons en parce que l'an prochain (on prit) on va se retrouver bien con avec les questions des PASS ptdrrrrr Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Thiasmine Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 il y a 1 minute, Lami_Molette a dit : RTT engagé, profitons en parce que l'an prochain (on prit) on va se retrouver bien con avec les questions des PASS ptdrrrrr aïe Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aligot Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 à l’instant, Lami_Molette a dit : RTT engagé, profitons en parce que l'an prochain (on prit) *on prie il y a 1 minute, Lami_Molette a dit : on va se retrouver bien con avec les questions des PASS ptdrrrrr Coucou Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Chat_du_Cheshire Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 T'es pas net Maraîchers. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted May 3, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted May 3, 2020 il y a 2 minutes, Aligot a dit : *on prie Ya plus SSH oser il y a 2 minutes, Aligot a dit : Coucou - D'accord, alors je n'ai aucune idée de ce dont tu me parles. Désolé. - Mais t'es RM de la matière - Certes. il y a 1 minute, Chat_du_Cheshire a dit : T'es pas net Maraîchers. Le ZOO. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau Petit_Bateau Posted May 3, 2020 Ancien du Bureau Share Posted May 3, 2020 il y a 24 minutes, Lami_Molette a dit : D'ailleurs @Aligot / @VESPA / @PierrickJunior / @Petit_Bateau / @Chat_du_Cheshire vous trouvez pas qu'on s'emmerde là? J'suis obligé" de bosser mes cours tutoweb est mort, plus aucune question c'est nul de fou... Et en plus il faut se lever tôt pour avoir des questions posées par ceux qui ne dorment pas mdr sinon dans la journée c'est mort, c'est trop rapide ! Y a pas un sujet qui reste vide plus de 5 min ... il y a 12 minutes, Chat_du_Cheshire a dit : T'es pas net Maraîchers. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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