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Anticorps de révélation


Go to solution Solved by PierrickSenior,

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Salut! 

J'ai un petit problème avec cet item du TD d'immunoanalyse 'La quantité de TNF recombinant purifié peut être dosée par cytométrie en flux avec un anticorps anti-TNF de capture couplé à une bille fluorescente dans le rouge et un anticorps anti-TNF de révélation couplé à un fluorochrome vert.'

Il a été considéré vrai mais je ne comprends pas pourquoi on a couplé l'anticorps anti-TNF de capture à une bille fluorescente. Pourquoi alors se donner la peine d'ajouter un AC de révélation? (la bille fluorescente va fluorescer, non? 

Mercii

Posted

Salut @EmmaFerjani !

 

En fait si tu ne couples pas tes anticorps avec une molécule fluorescente, tu ne pourras pas visualiser les deux populations différentes que tu tries. Certes les anticorps anti TNF vont se fixer sur le TNF, mais après il faut que le cytomètre puisse compter pour trier les deux populations et ça ça ne peut pas se faire si tu n'as pas des molécules fluorescentes. Je sais pas si j'ai répondu à ta question ?

  • Ancien Responsable Matière
Posted
  On 5/3/2020 at 1:20 PM, EmmaFerjani said:

dsl mais quelles 2 populations?? 

Expand  

Yooop, je pense que part "deux populations" elle voulait dire -> ce qui est du TNF recombinant et -> ce qui n'est pas du TNF recombinant. 

Ensuite comme on le voit dans les techniques de ELISA et de ELISPOT,  l'Ac de capture même couplé à un fluorochrome de suffit pas à la détection et on rajoute tjr un Ac de détection. Le principe est ici le même selon moi. 

Posted (edited)

hey! @PierrickJunior ouii je vois, mais du coup pourquoi utiliser une bille fluo avec cet Ac de capture.. On a bien au départ une population et on veut juste faire fluorescer la population de TNF non? Faire ressortir les TNF parmis touuuuutes les autres molécules du mélange (pour faire simple quoi XD). L'Ac de capture va fixer le TNF et l'Ac de détection va permettre cette detection à l'oeil nu par la fluorescence, si je ne me trompe pas. Je ne vois pas l'utilité de faire briller l'Ac de détection, on sait qu'il est là, c'est nous qui l'avons mis. (j'ai essayé de reformuler ma question pour etre plus claire hahaha @Aligot

Edited by EmmaFerjani
  • Ancien Responsable Matière
  • Solution
Posted

Du coup @EmmaFerjani, dans l'item on nous dit qu'on passe par une cytométrie en flux. Le principe de la cytométrie va être de dosé et trier différentes populations selon leurs fluorescence (je généralise peut être ou fait un gros raccourcit, mais c'est ce qu'on voit en QCM). 

Maintenant reprenons l'exemple du TNF. Imagine que le TNF qu'on veuille dosé est celui du plasma d'un patient.. Il faut avoir en tête que les concentrations en TNF a ce niveau là sont de l'ordre du pictogramme/L donc, tu te doutes, très dur à détecter. 

Du coup premièrement, non la fluorescence ne sera très certainement pas visible à l'oeil nu car trop peu de TNF aillant été capturé. Ensuite, l'utilisation de deux AC, un de capture et un détections va permettre de rendre l'expérience fiable et aussi (même surtout eventuellement) reproductible.

Donc la fluorescence présente mais pas forcément visible (en tout cas pas à l'oeil nu) va passer dans une cytométrie en flux pour être dosée et triée. 

 

Est ce que c'est plus clair pour toi ? Notamment c'est la notion de petite échelle qui nous oblige à faire tout ca. Sinon n'hésite pas. 

 

Bonne journée à toi. 

  • Ancien Responsable Matière
Posted
  On 5/3/2020 at 1:40 PM, PierrickJunior said:

Du coup @EmmaFerjani, dans l'item on nous dit qu'on passe par une cytométrie en flux. Le principe de la cytométrie va être de dosé et trier différentes populations selon leurs fluorescence (je généralise peut être ou fait un gros raccourcit, mais c'est ce qu'on voit en QCM). 

Maintenant reprenons l'exemple du TNF. Imagine que le TNF qu'on veuille dosé est celui du plasma d'un patient.. Il faut avoir en tête que les concentrations en TNF a ce niveau là sont de l'ordre du pictogramme/L donc, tu te doutes, très dur à détecter. 

Du coup premièrement, non la fluorescence ne sera très certainement pas visible à l'oeil nu car trop peu de TNF aillant été capturé. Ensuite, l'utilisation de deux AC, un de capture et un détections va permettre de rendre l'expérience fiable et aussi (même surtout eventuellement) reproductible.

Donc la fluorescence présente mais pas forcément visible (en tout cas pas à l'oeil nu) va passer dans une cytométrie en flux pour être dosée et triée. 

 

Est ce que c'est plus clair pour toi ? Notamment c'est la notion de petite échelle qui nous oblige à faire tout ca. Sinon n'hésite pas. 

 

Bonne journée à toi. 

Expand  

Comment tu fais trop le mec, je tiens à précisé à la population qu'il a répondu en caleçon. Redescend pierrick. 

Posted
  On 5/3/2020 at 1:59 PM, Lami_Molette said:

Comment tu fais trop le mec, je tiens à précisé à la population qu'il a répondu en caleçon. Redescend pierrick. 

Expand  

Que veux tu il est à l'aise partout le type

  • Ancien Responsable Matière
Posted (edited)
  On 5/3/2020 at 2:05 PM, Aligot said:

Que veux tu il est à l'aise partout le type

Expand  

Un peu trop à l'aise parfois.... 

 

D'ailleurs @Aligot / @VESPA / @PierrickJunior / @Petit_Bateau / @Chat_du_Cheshire vous trouvez pas qu'on s'emmerde là? J'suis obligé" de bosser mes cours tutoweb est mort, plus aucune question c'est nul de fou...

 

 

 

Edited by Lami_Molette
Posted (edited)
  On 5/3/2020 at 2:05 PM, Lami_Molette said:

Un peu trop à l'aise parfois.... 

 

D'ailleurs @Aligot / @VESPA / @PierrickJunior / @Petit_Bateau / @Chat_du_Cheshire vous trouvez pas qu'on s'emmerde là? J'suis obligé" de bosser mes cours tutoweb est mort, plus aucune question c'est nul de fou...

 

 

 

Expand  

mdrr j’ai oublié c’est quoi révisé mes cours donc j’actualise la page toutes les minutes en attente de questions, en vain, je m’en vais réviser pour vous poser des questions, à+

Edited by VESPA
  • Ancien Responsable Matière
Posted
  On 5/3/2020 at 2:09 PM, VESPA said:

J’ai oublié c’est quoi révisé mes cours donc j’actualise la page toutes les minutes en attente de questions, en vain

Expand  

Je ne suis donc pas seul. 

Posted
  On 5/3/2020 at 2:05 PM, Lami_Molette said:

D'ailleurs @Aligot / @VESPA / @PierrickJunior / @Petit_Bateau / @Chat_du_Cheshire vous trouvez pas qu'on s'emmerde là? J'suis obligé" de bosser mes cours tutoweb est mort, plus aucune question c'est nul de fou...

Expand  

Mais oui, on peut même plus se battre pour un sujet, moi je dis ça sent la retraite pour nous

 

  On 5/3/2020 at 2:09 PM, VESPA said:

 je m’en vais réviser pour vous posez des questions, à+

Expand  

Je compte les minutes

 

  • Ancien Responsable Matière
Posted
  On 5/3/2020 at 2:13 PM, Aligot said:

Mais oui, on peut même plus se battre pour un sujet, moi je dis ça sent la retraite pour nous

Expand  

RTT engagé, profitons en parce que l'an prochain (on prit) on va se retrouver bien con avec les questions des PASS ptdrrrrr

  • Ancien Responsable Matière
Posted
  On 5/3/2020 at 2:17 PM, Aligot said:

*on prie

Expand  

Ya plus SSH oser

 

  On 5/3/2020 at 2:17 PM, Aligot said:

Coucou

Expand  

- D'accord, alors je n'ai aucune idée de ce dont tu me parles. Désolé. 

- Mais t'es RM de la matière

- Certes.

  On 5/3/2020 at 2:20 PM, Chat_du_Cheshire said:

T'es pas net Maraîchers.

Expand  

Le ZOO.

  • Ancien du Bureau
Posted
  On 5/3/2020 at 2:05 PM, Lami_Molette said:

D'ailleurs @Aligot / @VESPA / @PierrickJunior / @Petit_Bateau / @Chat_du_Cheshire vous trouvez pas qu'on s'emmerde là? J'suis obligé" de bosser mes cours tutoweb est mort, plus aucune question c'est nul de fou...

Expand  

Et en plus il faut se lever tôt pour avoir des questions posées par ceux qui ne dorment pas mdr sinon dans la journée c'est mort, c'est trop rapide ! Y a pas un sujet qui reste vide plus de 5 min ... 😅⛵

  On 5/3/2020 at 2:20 PM, Chat_du_Cheshire said:

T'es pas net Maraîchers.

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