EmmaFerjani Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 Salut! J'ai u n problème concernant la technique ELIspot, si quelqu'un veut bien m'expliquer: en cours on l'a distingué d'ELISA. ELISA va quantifier les Ac ou cytokines et ELIspot sert à quantifier les cellules secrétrices d'antigènes. Et puis, pour la méthode, on a détecté les Ag qui ont été sécrétés (comme pour ELISA, non?): comment cela nous permet-il alors de quantifier les CELLULES productrices? Je veux dire, est-ce que toutes les cellules qu'on a mis dans le tube au tout début vont secreter la meme quantité d'Ac, comment en etre sur? Et puis, dans le poly on dit juste qu'on a mis des cellules, mais elles semblent differentes. Du coup, on n'a pas mis un seul type de cellules? Comment savoir lesquelles ont secrété ? Je ne sais pas si je dois reformuler hahahha dites le moi mercii Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Jujugulaire Posted May 3, 2020 Solution Share Posted May 3, 2020 Alors je vais essayer de t'expliquer ce que je comprends Elisa tu quantifies les AC solubles ou Ag donc déjà présents dans ton échantillon (type sérum par exemple) alors que Elispot au départ aucun AG n'est présent : il faut cultiver la cellule dans un milieu adapté pour qu'elle se mette à sécréter ton Ag et qu'il soit ainsi détectable En Elispot, la quantité d'AC de détection sera proportionnelle à la quantité de molécules sécrétées (et retenues par l'AC de capture) donc tu quantifies par rapport à une population de cellules en générale: plus le marquage sera intense et plus dans ton mélange il y aura de cellules sécrétrices. Après je ne suis pas sure que, si tu disposes d'un mélange de cellules hétérogènes qui nécessitent un même milieu de culture pour sécréter (et qui sécrètent la même chose), tu peux différencier quelle population a le plus sécrété ... J'espère que j'ai été claire et que ca répond un peu à tes questions... Bonne journée ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
EmmaFerjani Posted May 3, 2020 Author Share Posted May 3, 2020 Hello! @juliettef merci pour l’explication! mais du coup c'est juste proportionnel? On voit juste ce qu'à secrété la population entière et non pas une cellule. Du coup, je ne sais pas si, pour savoir si une cellule secrété beaucoup ou pas, pouvoir diviser le nombre d’anticorps sécrétés sur le nombre de cellules sécrétrices parce qu'on ne sait pas si toutes les cellules vont sécréter le meme nombre d'anticorps. En fait je sais pas si j'ai été claire ou pas et si je dis n'importe quoi hahaha Je veux dire.. Une des cellules par exemple aurait pu sécréter beaaaaucoup d'Ac alors qu'une autre ne sera pas fonctionnelle Du coup, on ne pourra pas bien quantifier les cellules productrices à la fin non ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Jujugulaire Posted May 3, 2020 Share Posted May 3, 2020 (edited) Alors j'ai fait des recherches et voici ce que j'ai trouvé : https://www.rndsystems.com/products/elispot-assay-principle En fait, la technique est tellement précise qu'elle peut détecter le pouvoir de sécrétion d'1 seule cellule et chaque point correspond à 1 cellule et ce qu'elle a sécrété dans son environnement proche, local Et après une machine peut numérer ou ca peut se faire au microscope Edited May 3, 2020 by juliettef Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
EmmaFerjani Posted May 3, 2020 Author Share Posted May 3, 2020 ahh je vois! merciii @juliettef Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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