EmmaTOM Posted April 29, 2020 Posted April 29, 2020 Bonjouuur, j'aurais 2 petites questions https://zupimages.net/viewer.php?id=20/18/4eyd.png - Je ne comprend pas la notion de "clonage orienté" dans l'item A et D - J'aimerais qu'on m'explique la E aussi Merciii beacouuuuuup Quote
Metallica Posted April 29, 2020 Posted April 29, 2020 (edited) Salut il y a 46 minutes, LucileMacBernik a dit : Je ne comprend pas la notion de "clonage orienté" dans l'item A et D Clonage orienté =insertion dans un seul sens Clonage non orienté = insertion possible dans le 2 sens :)) il y a 46 minutes, LucileMacBernik a dit : - J'aimerais qu'on m'explique la E aussi La condition pour que pour Cet item soit vrai ,c'est qu'EcoRI coupe deux fois au niveau du plasmide recombinant or tu peux voir qu il n y a initialement qu un seul site attaquable par cette ER et que l'insertion de l insert via BamHI ne crée pas le nouveaux sites reconnu par EcoRI donc à priori il est faux Edited April 29, 2020 by Metallica Quote
EmmaTOM Posted April 30, 2020 Author Posted April 30, 2020 @Metallicadu coup j'avais oublié de mettre les réponses ahah, c'est le poly de Pâques de cette année et DE sont comptées vrais Mais du coup je comprend pas pourquoi la D est compté vraie, ça serait un clonage non orienté non ? Etsi j'ai bien compris, si on avait eu 2 sites sur le CDNA et que l'enzyme qui aurait coupé aurait eu les mêmes "bouts" que EcoRI ça aurait pu faire 2 fragments? Quote
Solution Metallica Posted April 30, 2020 Solution Posted April 30, 2020 (edited) Il y a 3 heures, LucileMacBernik a dit : Mais du coup je comprend pas pourquoi la D est compté vraie, ça serait un clonage non orienté non ? HindIII et NotI generent des sites non compatibles entre eux ce qui fait que le plasmide ne pourra s insérer que selon une seule orientation (HindIII avec HindIII et NotI avec NotI) Il y a 3 heures, LucileMacBernik a dit : Etsi j'ai bien compris, si on avait eu 2 sites sur le CDNA et que l'enzyme qui aurait coupé aurait eu les mêmes "bouts" que EcoRI ça aurait pu faire 2 fragments? En fait il faut juste savoir s'il y a 2 sites attaquables par EcoRI sur le plasmide recombinant pour liberer deux fragments . Dans ce genre de situations, les sites reassociés apres coupures par des ER,font souvent apparaître de nouvelles sequences reconnaissables par d autres ER. C est comme ca que j ai raisonné pour en conclure que l item était faux mais je n avais pas vu qu' il y avait tout simplement un site EcoRI a l intérieur du cdna du coup ça respecte les conditions pour obtenir deux fragments donc l item est juste :)) Edited April 30, 2020 by Metallica Quote
EmmaTOM Posted May 1, 2020 Author Posted May 1, 2020 @Metallica aaaaah d'accord je comprend mieux Merci beaucoup Quote
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