ambrette Posted April 26, 2020 Share Posted April 26, 2020 Bonjour ! J'aurai besoin d'aide s'il vous plait concernant le fonctionnement de CRISPR : dans les items, lorsque l'on souhaite modifier le génome, j'ai toujours du mal à savoir si on cherche à réaliser un KO ou un KI... Par exemple dans la dernière colle, on voulait rendre des souris dépourvues de mutation : selon moi, faire un KO signifie réaliser entre autres une recombinaison non homologue donc laisser la cellule se débrouiller toute seule pour réparer la cassure double brin : selon mon raisonnement, dans ce cas là, elle fera des erreurs (insertions, délétions etc) donc comment être sûrs que cela permettra bien de donner une souris "saine" ? Ainsi, comment distinguer le KO du KI dans les énoncés ? Je sais que c'est une question très large car tout dépend des formulations des items... Mais si il y avait des petites subtilités à comprendre je suis preneuse ! Merci beaucoup d'avance Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Juliethmoïde Posted April 26, 2020 Solution Share Posted April 26, 2020 (edited) Salut!! Le KI peut être utilisé dans différentes situations. On l'utilise souvent pour remplacer un gène muté dans le génome par le gène sauvage dépourvu de mutation. On peut aussi l'utiliser pour remplacer un gène sain par un gène possédant une mutation précise. On réalise cela lorsque que l'on veut par exemple étudier l'influence d'une mutation sur le fonctionnement de la protéine. Le KO consiste à inactiver un gène. Pour cela on peut réaliser une coupure avec CRISPR Cas 9 puis laisser la NHEJ faire son travail. En effet la recombinaison non homologue va réparer la cassure mais in fine le gène possèdera des insertions et/ou des délétions. Ces insertions et délétions vont entraîner une modification du cadre de lecture ce qui est très souvent à l'origine de l'inactivation de la protéine. Elles peuvent aussi dans une moindre mesure entrainer des pertes de fonction inactivant la protéine. Une autre façon de réaliser un KO est de remplacer le gène cible par un gène rapporteur. Pour le QCM de la colle ils partent du principe qu'en réalisant un KO du gène on va l'inactiver totalement et donc on aura plus de problème avec cette mutation. Cette hypothèse reste purement théorique. En effet tu as raison avec le KO on ne connais pas par avance la séquence que l'on va obtenir. De plus si ce gène possédait une fonction importante il risque d'y avoir des conséquences au niveau du phénotype. Aussi je suis d'accord avec toi en pratique on réaliserai plutôt un KI en remplaçant le gène muté par le gène sauvage à l'aide de CRISPR Cas 9. Voilà j'espère que toutes ces notions te paraissent plus claires. N'hésite à revenir vers moi si tu as encore des interrogations! Bonne soirée et bon courage! Edited April 27, 2020 by Juliethmoïde Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
ambrette Posted April 27, 2020 Author Share Posted April 27, 2020 C'est très clair ! Je comprends surtout pour la perturbation du cadre de lecture, Bettina l'avait dit aussi au S1, souvent il y a des codons stop qui apparaissent Cependant oui je trouve assez difficile de répondre à ce genre d'items quand il y a des petites ambiguïtés comme ça... J'espère que les qcms du concours seront clairs Merci beaucoup! Bon courage pour la suite ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Juliethmoïde Posted April 27, 2020 Share Posted April 27, 2020 Oui ne t'en fais pas le jour du concours les données présentes dans l'énoncé laisse peu de place à l’ambiguïté. Tu pourras le voir en faisant les annales! Merci!! Bonne journée Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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