léon-le-bourdon Posted April 22, 2020 Share Posted April 22, 2020 Bonjour, l'Elispot sert déjà à quantifier les cellules sécrétrices d'Ac ? Sert-il aussi à quantifier les Ag ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Metallica Posted April 22, 2020 Solution Share Posted April 22, 2020 Slt Il y a 3 heures, léon-le-bourdon a dit : Sert-il aussi à quantifier les Ag Les cellules secretrices d'Ag ou les Ag secrétés ? Dans le premier cas oui si l'on met en place un dispositif en ELISA sandwich et dans le deuxième cas non parce qu'on ne cherche pas à mesurer la DO pour doser l'espèce qui a été secrétée Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
léon-le-bourdon Posted April 22, 2020 Author Share Posted April 22, 2020 donc l'elispot peut détecter les cellules sécrétrices d'Ac et d'Ag ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted April 22, 2020 Share Posted April 22, 2020 il y a 3 minutes, léon-le-bourdon a dit : donc l'elispot peut détecter les cellules sécrétrices d'Ac et d'Ag ? Yup absolument :)) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Lemillion Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 Le 22/04/2020 à 16:30, Metallica a dit : Slt Les cellules secretrices d'Ag ou les Ag secrétés ? Dans le premier cas oui si l'on met en place un dispositif en ELISA sandwich et dans le deuxième cas non parce qu'on ne cherche pas à mesurer la DO pour doser l'espèce qui a été secrétée salut @Metallica ducoup en elispot on ne mesure jamais la concentration de l'ag/ac secreté cest pour ça que cet item est faux ? https://zupimages.net/viewer.php?id=20/19/ha6m.png mais j'ai du mal a comprendre pourquoi on quantifie pas la dose de particule sécrétées par contre on quantifie les cellules qui sécrètent, en numérant les taches coloré on peut pas trouver la quantité de particule secrétées ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 (edited) il y a 11 minutes, Lemillion a dit : ducoup en elispot on ne mesure jamais la concentration de l'ag/ac secreté C'est pas l'objectif non c'est pour ça que le produit généré par l'enzyme précipite (insoluble) au lieu de devenir soluble (dosage++) On le fait précipiter parce qu'on cherche à établir des spots (points lumineux localisés) alors qu'en dosage le produit coloré se solubilise dans tout le solvant et au final t'observes rien puisque ton seul objectif c'est de mesurer la D.O Edited May 8, 2020 by Metallica Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Lemillion Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 il y a 21 minutes, Metallica a dit : C'est pas l'objectif non c'est pour ça que le produit généré par l'enzyme précipite (insoluble) au lieu de devenir soluble (dosage++) On le fait précipiter parce qu'on cherche à établir des spots (points lumineux localisés) alors qu'en dosage le produit coloré se solubilise dans tout le solvant et au final t'observes rien puisque ton seul objectif c'est de mesurer la D.O ptdrr j'avais jamais fait le lien merci milles fois Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Lemillion Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 (edited) @Metallica dsl je relance mais ducoup sur un document de ce type https://zupimages.net/viewer.php?id=20/19/vkuz.png on a un dot blot en DO, on a utilisé un produit devenu coloré soluble ou alors un précipité coloré ? c'est possible de mesurer la DO a partir du moment ou il y a de la couleur donc ca devrait marcher avec un précipité coloré ? parce que pour le dot blot l'immunodetection se fait par précipitation selon le poly ensuite le dot blot est semi quantitatif et la on a toutes les barres a 2 donc y'en a beaucoup mais ca pourrait très bien entre entre 0 et 2 donc en gros si on a un ac1 a 1 et un ac2 a 2 de DO, on peut pas les numérer seulement dire que l'ac1 est moins présent que l'ac 2 je m'éparpille la mdrr mais pour résumer, en semi quantitatif c'est : pas, peu , moyen, beaucoup Edited May 8, 2020 by Lemillion Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 (edited) il y a une heure, Lemillion a dit : on a un dot blot en DO, on a utilisé un produit devenu coloré soluble ou alors un précipité coloré ? Soluble je pense il y a une heure, Lemillion a dit : c'est possible de mesurer la DO a partir du moment ou il y a de la couleur donc ca devrait marcher avec un précipité coloré ? Là ça fait appel à des vieilles connaissances de lycée mdrr , la mesure de la D.O par spectrophotométrie se fait dans cuve avec un produit solubilisé dans le solvant,solvant qui occupe la cuve. Après peut-etre que le produit précipité produit un signal lumineux qui sera exploitable pour déterminer une D.O mais alors ça serait étrange de ranger ce type de dot-blot dans la catégorie des techniques qualitatives. il y a une heure, Lemillion a dit : parce que pour le dot blot l'immunodetection se fait par précipitation selon le poly Tu as raison c'est ce qui est dit ...je pense que le dot-bot présenté dans le poly est un variant des techniques dot-blot cherchant à mettre en évidence, la même chose que ce que l'on observe en WB c'est à un dire un Ag particulier d’où l'utilisation d'un produit insoluble. Cependant, ça ne doit pas se limiter qu'à ça car une des différences entre WB et dot-blot, c'est que dans le dot-blot on dispose "des gouttes de solution de protéines" et que l'on ne les fait pas migrer. En ayant ces deux particularités, on devrait pouvoir réaliser un test type ELISA indirect si l'on choisit d'utiliser une enzyme générant un produit soluble C'est vrai que ça soulève un certain paradoxe car on dit que c'est semi-quantitatif mais on l'utilise pour mesurer une D.O , D.O présentée comme l'élément clé des techniques quantitatives. Peut-être qu'on peut mesurer à partir d'un produit précipité mais je reste sceptique par rapport à ça parce que les résultats d'expereinces présentant les mesures de D.O en dot-blot sont similaires à celles de l'ELISA indirect alors que cette dernière utilise des produits colorés solubles. Mais au final, je pense que ça peut être soit quantitatif ou soit semi-quantitatif selon ce qu'on décide de faire durant notre dot-blot Je sais pas si ça t'aide Edited May 8, 2020 by Metallica Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Lemillion Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 (edited) il y a 20 minutes, Metallica a dit : Soluble je pense Là ça fait appel à des vieilles connaissances de lycée mdrr , la mesure de la D.O par spectrophotométrie se fait dans cuve avec un produit solubilisé dans le solvant,solvant qui occupe la cuve. Après peut-etre que le produit précipité produit un signal lumineux qui sera exploitable pour déterminer une D.O mais alors ça serait étrange de ranger ce type de dot-blot dans la catégorie des techniques qualitatives. Tu as raison c'est ce qui est dit ...je pense que le dot-bot présenté dans le poly est un variant des techniques dot-blot cherchant à mettre en évidence, la même chose que ce que l'on observe en WB c'est à un dire un Ag particulier d’où l'utilisation d'un produit insoluble. Cependant, ça ne doit pas se limiter qu'à ça car une des différences entre WB et dot-blot, c'est que dans le dot-blot on dispose "des gouttes de solution de protéines" et que l'on ne les fait pas migrer. En ayant ces deux particularités, on devrait pouvoir réaliser un test type ELISA indirect si l'on choisit d'utiliser une enzyme générant un produit soluble C'est vrai que ça soulève un certain paradoxe car on dit que c'est semi-quantitatif mais on l'utilise pour mesurer une D.O , D.O présentée comme l'élément clé des techniques quantitatives. Peut-être qu'on peut mesurer à partir d'un produit précipité mais je reste sceptique par rapport à ça parce que les résultats d'expereinces présentant les mesures de D.O en dot-blot sont similaires à celles de l'ELISA indirect alors que cette dernière utilise des produits colorés solubles. Mais au final, je pense que ça peut être soit quantitatif ou soit semi-quantitatif selon ce qu'on décide de faire durant notre dot-blot Je sais pas si ça t'aide ça m'aide à comprendre a quel point la recherche est vaste et complexe mais néanmoins interessante ahaha non en vrai ce que tu dis est cohérent mais ça depasse largement le champ des connaissance d'un paces lambda, c'était juste une curiosité de ma part il n'y aura jamais de qcm sur ça merci d'avoir pris le temps Edited May 8, 2020 by Lemillion Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 il y a 1 minute, Lemillion a dit : vaste et complexe mais néanmoins interessante ahaha il y a 3 minutes, Lemillion a dit : c'était juste une curiosité de ma part Mais c'est cool de se poser ce genre de question hehe il y a 4 minutes, Lemillion a dit : il n'y aura jamais de qcm sur ça Heureusement ptn il y a 4 minutes, Lemillion a dit : merci d'avoir pris le temps Et de riennn Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Lemillion Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 (edited) @Metallica attend mais ducoup on peut imaginer de révéler un WB par solubilisation et ainsi avoir une analyse quantitative en DO ? jsp si c'est faisable techniquement mais dans le concept ? (dsl je m'arrete plus) Edited May 8, 2020 by Lemillion Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 il y a 4 minutes, Lemillion a dit : attend mais ducoup on peut imaginer de révéler un WB par solubilisation et ainsi avoir une analyse quantitative en DO Ben du coup par principe le WB empêche un peu de faire ça Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Lemillion Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 (edited) il y a 9 minutes, Metallica a dit : Ben du coup par principe le WB empêche un peu de faire ça ptdrr je me suis emballé, mais je comprend pas pourquoi vu que ça se rapproche d'un dot blot sauf que l'on a en moins une séparation en électrophorèse pourquoi ce ne serait pas possible ? Edited May 8, 2020 by Lemillion Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 il y a 5 minutes, Lemillion a dit : moins une séparation en électrophorèse C'est justement elle qui rend l'extrait de départ difficilement exploitable pour faire autre chose Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Lemillion Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 (edited) il y a 56 minutes, Metallica a dit : C'est justement elle qui rend l'extrait de départ difficilement exploitable pour faire autre chose @Metallica pourquoi n'est-ce pas possible de prendre un anticorps anti igg humain de souris relié a une enzyme qui devient soluble ? comment la dénaturation peut elle empechée une solubilisation ? Edited May 8, 2020 by Lemillion Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 Il y a 3 heures, Lemillion a dit : pourquoi n'est-ce pas possible de prendre un anticorps anti igg humain de souris relié a une enzyme qui devient soluble ? Si t as surement raison ça doit etre possible mais c est plus un western-BLOT (blot voulant dire tache) du coup c'est pour ça qu'au final c'est etrange d associer Dot-BLOT à une mesure de Do. Ça doit être un abus de langage du cours mais l'idée c'est qu on réalise pour la mesure,les même étapes qu un dot blot (sauf pour le produit généré par l enzyme) c'est a dire une mesure sur un extrait non dénaturé (d'où la silimilitude des résultats entre ce prétendu "dot blot" et l'elisa indirect). Du coup pour le WB (qui n'en sera plus vraiment du coup) tu pourras sans doutes le faire (ça à pas grand intérêt dans les qcms de toute façon) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Lemillion Posted May 9, 2020 Share Posted May 9, 2020 Il y a 7 heures, Metallica a dit : Si t as surement raison ça doit etre possible mais c est plus un western-BLOT (blot voulant dire tache) du coup c'est pour ça qu'au final c'est etrange d associer Dot-BLOT à une mesure de Do. Ça doit être un abus de langage du cours mais l'idée c'est qu on réalise pour la mesure,les même étapes qu un dot blot (sauf pour le produit généré par l enzyme) c'est a dire une mesure sur un extrait non dénaturé (d'où la silimilitude des résultats entre ce prétendu "dot blot" et l'elisa indirect). Du coup pour le WB (qui n'en sera plus vraiment du coup) tu pourras sans doutes le faire (ça à pas grand intérêt dans les qcms de toute façon) oui c'est sur puis jsp si les résultats seraient de bonne qualité quoi qu'il en soit je vais m'en tenir au cours ahaha merci encore Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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