Elispot

[léon-le-bourdon]

Bonjour, l'Elispot sert déjà à quantifier les cellules sécrétrices d'Ac ? Sert-il aussi à quantifier les Ag ?

[Metallica]

Slt 

 

Il y a 3 heures, léon-le-bourdon a dit :

Sert-il aussi à quantifier les Ag

 

Les cellules secretrices d'Ag ou les Ag secrétés ? 

 

Dans le premier cas oui si l'on met en place un dispositif en ELISA sandwich et dans le deuxième cas non parce qu'on ne cherche pas à mesurer la DO pour doser l'espèce qui a été secrétée

[léon-le-bourdon]

donc l'elispot peut détecter les cellules sécrétrices d'Ac et d'Ag ?

[Metallica]

il y a 3 minutes, léon-le-bourdon a dit :

donc l'elispot peut détecter les cellules sécrétrices d'Ac et d'Ag ?

 

Yup absolument :))

[Lemillion]

Le 22/04/2020 à 16:30, Metallica a dit :

Slt 

 

 

Les cellules secretrices d'Ag ou les Ag secrétés ? 

 

Dans le premier cas oui si l'on met en place un dispositif en ELISA sandwich et dans le deuxième cas non parce qu'on ne cherche pas à mesurer la DO pour doser l'espèce qui a été secrétée

salut @Metallica

ducoup en elispot on ne mesure jamais la concentration de l'ag/ac secreté

cest pour ça que cet item est faux ?

https://zupimages.net/viewer.php?id=20/19/ha6m.png

mais j'ai du mal a comprendre pourquoi on quantifie pas la dose de particule sécrétées par contre on quantifie les cellules qui sécrètent,

en numérant les taches coloré on peut pas trouver la quantité de particule secrétées ?

[Metallica]

il y a 11 minutes, Lemillion a dit :

ducoup en elispot on ne mesure jamais la concentration de l'ag/ac secreté

 

C'est pas l'objectif non c'est pour ça que le produit généré par l'enzyme précipite (insoluble) au lieu de devenir soluble (dosage++)

 

On le fait précipiter parce qu'on cherche à établir des spots (points lumineux localisés) alors qu'en dosage le produit coloré se solubilise dans tout le solvant et au final t'observes rien puisque ton seul objectif c'est de mesurer la D.O

Edited May 8, 2020 by Metallica

[Lemillion]

il y a 21 minutes, Metallica a dit :

 

C'est pas l'objectif non c'est pour ça que le produit généré par l'enzyme précipite (insoluble) au lieu de devenir soluble (dosage++)

 

On le fait précipiter parce qu'on cherche à établir des spots (points lumineux localisés) alors qu'en dosage le produit coloré se solubilise dans tout le solvant et au final t'observes rien puisque ton seul objectif c'est de mesurer la D.O

ptdrr j'avais jamais fait le lien merci milles fois 

[Lemillion]

@Metallica

dsl je relance mais ducoup sur un document de ce type 

https://zupimages.net/viewer.php?id=20/19/vkuz.png

on a un dot blot en DO, on a utilisé un produit devenu coloré soluble ou alors un précipité coloré ? c'est possible de mesurer la DO a partir du moment ou il y a de la couleur donc ca devrait marcher avec un précipité  coloré ? parce que pour le dot blot l'immunodetection se fait par précipitation selon le poly

ensuite le dot blot est semi quantitatif et la on a toutes les barres a 2 donc y'en a beaucoup mais ca pourrait très bien entre entre 0 et 2

donc en gros si on a un ac1 a 1 et un ac2 a 2 de DO, on peut pas les numérer seulement dire que l'ac1 est moins présent que l'ac 2 

je m'éparpille la mdrr mais pour résumer, en semi quantitatif c'est : pas, peu , moyen, beaucoup

Edited May 8, 2020 by Lemillion

[Metallica]

il y a une heure, Lemillion a dit :

on a un dot blot en DO, on a utilisé un produit devenu coloré soluble ou alors un précipité coloré ?

 

Soluble je pense

 

il y a une heure, Lemillion a dit :

c'est possible de mesurer la DO a partir du moment ou il y a de la couleur donc ca devrait marcher avec un précipité  coloré ?

 

Là ça fait appel à des vieilles connaissances de lycée mdrr , la mesure de la D.O par spectrophotométrie se fait dans cuve avec un produit solubilisé dans le solvant,solvant qui occupe la cuve. Après peut-etre que le produit précipité produit un signal lumineux qui sera  exploitable pour déterminer une D.O mais alors ça serait étrange de ranger ce type de dot-blot dans la catégorie des techniques qualitatives.

 

il y a une heure, Lemillion a dit :

parce que pour le dot blot l'immunodetection se fait par précipitation selon le poly

 

Tu as raison c'est ce qui est dit ...je pense que le dot-bot présenté dans le poly est un variant des techniques dot-blot cherchant à mettre en évidence, la même chose que ce que l'on observe en WB c'est à un dire un Ag particulier d’où l'utilisation d'un produit insoluble. Cependant, ça ne doit pas se  limiter qu'à ça car une des différences entre WB et dot-blot, c'est que dans le dot-blot on dispose "des gouttes de solution de protéines" et que l'on ne les fait pas migrer. En ayant ces deux particularités, on devrait pouvoir réaliser un test type ELISA indirect si l'on choisit d'utiliser une enzyme générant un produit soluble

 

C'est vrai que ça soulève un certain paradoxe car on dit que c'est semi-quantitatif mais on l'utilise pour mesurer une D.O , D.O présentée comme l'élément clé des techniques quantitatives.

 

Peut-être qu'on peut mesurer à partir d'un produit précipité mais je reste sceptique par rapport à ça parce que les résultats d'expereinces présentant les mesures de D.O en dot-blot sont similaires à celles de l'ELISA indirect alors que cette dernière utilise des produits colorés solubles. 

 

Mais au final, je pense que ça peut être soit quantitatif ou soit semi-quantitatif selon ce qu'on décide de faire durant notre dot-blot

 

Je sais pas si ça t'aide

 

 

 

 

 

 

Edited May 8, 2020 by Metallica

[Lemillion]

il y a 20 minutes, Metallica a dit :

 

Soluble je pense

 

 

Là ça fait appel à des vieilles connaissances de lycée mdrr , la mesure de la D.O par spectrophotométrie se fait dans cuve avec un produit solubilisé dans le solvant,solvant qui occupe la cuve. Après peut-etre que le produit précipité produit un signal lumineux qui sera  exploitable pour déterminer une D.O mais alors ça serait étrange de ranger ce type de dot-blot dans la catégorie des techniques qualitatives.

 

 

Tu as raison c'est ce qui est dit ...je pense que le dot-bot présenté dans le poly est un variant des techniques dot-blot cherchant à mettre en évidence, la même chose que ce que l'on observe en WB c'est à un dire un Ag particulier d’où l'utilisation d'un produit insoluble. Cependant, ça ne doit pas se  limiter qu'à ça car une des différences entre WB et dot-blot, c'est que dans le dot-blot on dispose "des gouttes de solution de protéines" et que l'on ne les fait pas migrer. En ayant ces deux particularités, on devrait pouvoir réaliser un test type ELISA indirect si l'on choisit d'utiliser une enzyme générant un produit soluble

 

C'est vrai que ça soulève un certain paradoxe car on dit que c'est semi-quantitatif mais on l'utilise pour mesurer une D.O , D.O présentée comme l'élément clé des techniques quantitatives.

 

Peut-être qu'on peut mesurer à partir d'un produit précipité mais je reste sceptique par rapport à ça parce que les résultats d'expereinces présentant les mesures de D.O en dot-blot sont similaires à celles de l'ELISA indirect alors que cette dernière utilise des produits colorés solubles. 

 

Mais au final, je pense que ça peut être soit quantitatif ou soit semi-quantitatif selon ce qu'on décide de faire durant notre dot-blot

 

Je sais pas si ça t'aide

 

 

 

 

 

 

ça m'aide à comprendre a quel point la recherche est vaste et complexe mais néanmoins interessante ahaha

non en vrai ce que tu dis est cohérent mais ça depasse largement le champ des connaissance d'un paces lambda, c'était juste une curiosité de ma part il n'y aura jamais de qcm sur ça

merci d'avoir pris le temps 

 

Edited May 8, 2020 by Lemillion

[Metallica]

il y a 1 minute, Lemillion a dit :

vaste et complexe mais néanmoins interessante ahaha

 

il y a 3 minutes, Lemillion a dit :

c'était juste une curiosité de ma part

 

Mais c'est cool de se poser ce genre de question hehe

 

il y a 4 minutes, Lemillion a dit :

il n'y aura jamais de qcm sur ça

Heureusement ptn

 

 

il y a 4 minutes, Lemillion a dit :

merci d'avoir pris le temps 

 

Et de riennn

[Lemillion]

@Metallica

attend mais ducoup on peut imaginer de révéler un WB par solubilisation et ainsi avoir une analyse quantitative en DO ?

jsp si c'est faisable techniquement mais dans le concept ?

(dsl je m'arrete plus)

Edited May 8, 2020 by Lemillion

[Metallica]

il y a 4 minutes, Lemillion a dit :

attend mais ducoup on peut imaginer de révéler un WB par solubilisation et ainsi avoir une analyse quantitative en DO

 

Ben du coup par principe le WB empêche un peu de faire ça

[Lemillion]

il y a 9 minutes, Metallica a dit :

 

Ben du coup par principe le WB empêche un peu de faire ça

ptdrr je me suis emballé, mais je comprend pas pourquoi vu que ça se rapproche d'un dot blot sauf que l'on a en moins une séparation en électrophorèse 

pourquoi ce ne serait pas possible ?

 

Edited May 8, 2020 by Lemillion

[Metallica]

il y a 5 minutes, Lemillion a dit :

moins une séparation en électrophorèse 

 

C'est justement elle qui rend l'extrait de départ  difficilement exploitable pour faire autre chose

[Lemillion]

il y a 56 minutes, Metallica a dit :

 

C'est justement elle qui rend l'extrait de départ  difficilement exploitable pour faire autre chose

@Metallica pourquoi n'est-ce pas possible de prendre un anticorps anti igg humain de souris relié a une enzyme qui devient soluble ?

comment la dénaturation peut elle empechée une solubilisation ?

Edited May 8, 2020 by Lemillion

[Metallica]

Il y a 3 heures, Lemillion a dit :

pourquoi n'est-ce pas possible de prendre un anticorps anti igg humain de souris relié a une enzyme qui devient soluble ?

 

Si t as surement raison ça doit etre possible mais c est plus un western-BLOT (blot voulant dire tache) du coup c'est pour ça qu'au final c'est etrange d associer Dot-BLOT à une mesure de Do. Ça doit être un abus de langage du cours mais l'idée c'est qu on réalise pour la mesure,les même étapes qu un dot blot (sauf pour le produit généré par l enzyme) c'est a dire une mesure sur un extrait non dénaturé (d'où la silimilitude des résultats entre ce prétendu "dot blot" et l'elisa indirect). Du coup pour le WB (qui n'en sera plus vraiment du coup) tu pourras sans doutes le faire (ça à pas grand intérêt dans les qcms de toute façon)

[Lemillion]

Il y a 7 heures, Metallica a dit :

 

Si t as surement raison ça doit etre possible mais c est plus un western-BLOT (blot voulant dire tache) du coup c'est pour ça qu'au final c'est etrange d associer Dot-BLOT à une mesure de Do. Ça doit être un abus de langage du cours mais l'idée c'est qu on réalise pour la mesure,les même étapes qu un dot blot (sauf pour le produit généré par l enzyme) c'est a dire une mesure sur un extrait non dénaturé (d'où la silimilitude des résultats entre ce prétendu "dot blot" et l'elisa indirect). Du coup pour le WB (qui n'en sera plus vraiment du coup) tu pourras sans doutes le faire (ça à pas grand intérêt dans les qcms de toute façon)

oui c'est sur puis jsp si les résultats seraient de bonne qualité

quoi qu'il en soit je vais m'en tenir au cours ahaha

merci encore