Ancien Responsable Matière Mazlo Posted April 20, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted April 20, 2020 Hello hello ! La manière de séparer les différentes transgenèses et d'obtenir des Ki - Ko n'est pas très claire pour moi. Donc d'abord, est-ce qu'on peut faire du CrisprCas 9 avec les deux types de transgenèse? Existe-t-il une Recombinaison non homologue avec ou sans CrisprCs9 ? (j'essaie de mettre en relation les cours des Pr Bettina et Monferran mais déjà est-ce qu'on peut le faire ?) Ensuite, je pensais que les transgenèses additives ne pouvaient faire que des KO mais apparemment selon le Pr Monferran ce serait possible de faire aussi des KI (mais je suis pas sûre du tout?) Breeef si quelqu'un pouvait me faire un petit récap' sur quelles types de transgenèse ou recombinaison permettent d'obtenir des KI et/ou KO ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution AdamDeSagesse Posted April 20, 2020 Solution Share Posted April 20, 2020 (edited) Hey ! Le Knock-out et le Knock-in sont des termes utilisés dans le cadre de la transgénèse ciblée, soit par recombinaison homologue. Le principe du Knock-out est de remplacer un gène par un autre gène sans fonction dans l'idée d'éliminer le gène initiale : lorsqu'on effectue de la transgenèse additive, on cherche à insérer de l'ADN dans un génome mais cet ADN se place aléatoirement, tu imagines alors bien que les probabilités sont très faibles pour que cet ADN s'insère au milieu d'un gène que l'on cherche à éliminer, d'autant plus qu'il n'y a pas de notion de "remplacement" ici. CRISPR/Cas9 n'est pas utilisé dans le cadre de la transgenèse additive, mais il permet de faire de la transgenèse ciblée. Honnêtement, j'ai quelques réserves toutefois, d'autant plus si le Pr Monferran a dit qu'il est possible de faire des KI avec une transgenèse additive. Peut-être que les professeurs te répondront mieux que moi sur Moodle. J'espère avoir pu te rapporter des réponses, bon courage et bonne journée ! Edited April 20, 2020 by AdamDeSagesse Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Hypnos Posted April 20, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted April 20, 2020 Salut ! Je me permets d’intervenir mais je t’invite à poser des questions aux enseignants si ce n’est pas clair 3 types de transgeneses : - additive - recombinaison homologue les deux premières traités par Bettina - ciblée par Montferran Avec l’additive, on fait exclusivement des KI comme dit par @AdamDeSagesse, car on place aléatoirement le géne. Pas de selection avant retro-transplantation chez la femelle pseudo-gestante, on identifiera à la naissance (plutôt 3 semaines apres par ponction de la queue et PCR ceux qui exprime le transgene). On obtient des individus complètement transgéniques (transgenese faite sur ovocyte fecondé) pour la RH, faite sur cellule embryonnaire, obtention d’individu chimerique, selection avant implatation dans blastocyste puis dans femelle pseudo-gestante On peut faire des KI, par exemple si on cherche à faire exprimer un gène sous un promoteur spécifique, ou un KO, en mettant un gène de résistance aux antibio flanqué de la séquence cible pour la recombinaison ciblée (aka Crisper-Cas9), one ne parle pas de RH lorsque l’on fait un KO, mais de NHEJ, car en effet, la cas 9 comme après la sequence PAM, et laisse la cellule se reparer seule, et naturellement elle va faire une NHEJ qui induit un INDEL, et donc peut bloquer l’expression du gène (et pn peut faire des doubles KO simplement en ciblant des séquences spécifiques de chaque allèle) et pour le KI, on fait une coupure, et on insère la copie que l’on veut par RH voilà, j’ai pas mis toutes les infos, mais ça doit compléter le premier message d’ @AdamDeSagesse Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Mazlo Posted April 21, 2020 Author Ancien Responsable Matière Share Posted April 21, 2020 @AdamDeSagesse @Paracelse merci pour vos réponses (en plus je viens de m'apercevoir que j'ai confondu KI et KO --'). C'est plus clair maintenant! Il y a 15 heures, Paracelse a dit : one ne parle pas de RH lorsque l’on fait un KO, mais de NHEJ, D'accord ça explique mieux la réponse du Pr Monferran sur Moodle comme quoi pas de KO pour la transgenèse avec CriprCas9. Et la transgenèse additive ne sert bien qu'à faire des KI. Bon je vais approfondir un peu plus mon cours et faire des QCM ça passera mieux! Merci encore et bonne journée Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Hypnos Posted April 21, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted April 21, 2020 @Mazlo attention, on peut faire un KO par Crisper-Cas9, mais il ne passe pas par une RH, mais par une NHEJ Je t’invite à reregarder les schémas du cours où en fait, tout est écrit, mais en tout petit Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Mazlo Posted April 21, 2020 Author Ancien Responsable Matière Share Posted April 21, 2020 il y a 2 minutes, Paracelse a dit : @Mazlo attention, on peut faire un KO par Crisper-Cas9, mais il ne passe pas par une RH, mais par une NHEJ Ah ok dans ma tête c'était Crisprcas9 = RH ouh là là faut vraiment que je fasse la différence ^^' Merci @Paracelse Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Recommended Posts
Join the conversation
You can post now and register later. If you have an account, sign in now to post with your account.
Note: Your post will require moderator approval before it will be visible.