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QCM immunotransfert


EniramJ
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Bonjour,

Je ne comprends pas l'item E de ce QCM (compté vrai) :

 

image.thumb.png.3f0146a5fd3409f6d34646ce578b44d5.png

 

Je ne comprends pas comment on peut être sûr que la protéine n'est faite que d'une seule sous-unité de 60 kDa ?

Merci d'avance pour votre aide : )

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Salut @EniramJ  !

 

En fait ds le résultat 1 tu vois 2 bandes de masses différentes qui correspondent donc à 2 sous unités (en théorie). Si tu fais la somme 20 + 40 tu trouves 60kDa. Or le résultat 2 présente 1 bande de 60kDa !  Donc t'en déduis que le mercapto ethanol a séparé les 2 sous unités de la protéine ds le résultat 1

 

J'espère que ça t'aide 😉 

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Merci @Awwa pour ta réponse ! Mais je ne comprends pas comment on peut savoir que la protéine ne présente pas en plusieurs exemplaires ces 2 bandes de 20 + 40 kDa ? Comment on sait que la protéine ne pèse que 60 kDa, et pas un multiple de 60 ? Par exemple, ça ne pourrait pas être une protéine de 120 kDa avec 2 fois les sous-unités de 20 + 40 kDa (reliées par des ponts disulfures) formant des structures de 60 kDa chacune, qui seraient reliées entre elles par des liaisons non covalentes ? (je ne sais pas si mon exemple est très clair 😅)

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  • Solution

 

il y a 37 minutes, EniramJ a dit :

Merci @Awwa pour ta réponse ! Mais je ne comprends pas comment on peut savoir que la protéine ne présente pas en plusieurs exemplaires ces 2 bandes de 20 + 40 kDa ? Comment on sait que la protéine ne pèse que 60 kDa, et pas un multiple de 60 ? Par exemple, ça ne pourrait pas être une protéine de 120 kDa avec 2 fois les sous-unités de 20 + 40 kDa (reliées par des ponts disulfures) formant des structures de 60 kDa chacune, qui seraient reliées entre elles par des liaisons non covalentes ? (je ne sais pas si mon exemple est très clair 😅)

 

Oui c'est tout à fait possible ! En soit on voit 1 bande mais ça peut être plusieurs superposées. C'est pour ça que Perret nous demande de considérer pour les qcm (où y a des techniques de séparation je précise)  que 1 bande = 1 sous unité sinon ça devient trop compliqué 😅  

 

Un moyen d'etre sûr c'est la technique de gel filtration qui te donnera le poids total de la protéine sous forme naturelle et là tu pourra comparer avec le résultat en SDS (qui est dénaturant)

Edited by Awwa
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