OxyGenS Posted April 6, 2020 Share Posted April 6, 2020 (edited) Salut, J'ai du mal à comprendre comment savoir si l'insert peut-être inséré dans un plasmide dans 1 seul sens (choisi ?) ou dans les 2 sens... J'ai compris : - que si on coupe le plasmide avec une seule enzyme et l'insert avec cette même enzyme aux 2 extrémités on peut l'avoir dans les 2 sens. Ça, ça me parait logique. Mais après j'ai noté qu'on peut fixer le sens... comment ? - que si on coupe le plasmide et l'insert avec 2 enzymes différentes, là on peut choisir le sens. Déjà, est-ce qu'on utilise par exemple les enzymes A et B pour couper le plasmide et A et B pour l'insert ou A et B pour le plasmide et C et D pour l'insert ? Et ensuite comment la personne peut se dire je mets telle extrémité de l'insert à ce niveau ? C'est assez flou pour moi, j'espère que vous comprenez mon souci... Concernant les vecteurs viraux : - rétrovirus et adénovirus sont des familles différentes par contre les lentivirus sont un type de rétrovirus ? Concernant le plasmide pcDNA3 : - est-ce que le sens de T7 et SP6 montre que T7 permet la transcription du brin anti-sens et SP6 du brin sens ? Concernant les vecteurs navettes : - ils permettent de passer d'un hôte procaryote à un hôte eucaryote mais j'ai pas bien compris comment ça se déroule. Et cette manip s'appelle une transfection ou transduction ? Concernant les phages recombinants : - qqun peut m'expliquer comment on les obtient svp ? Merci d'avance Edited April 6, 2020 by OxyGenS Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution dupuyadèle Posted April 6, 2020 Solution Share Posted April 6, 2020 (edited) Bonjour @OxyGenS ! Pour ta première question, je te propose en image un exemple de situation où sont utilisées 3 enzymes pour préparer un insert et un plasmide receveur, mais où seulement un seul sens d'insertion est possible. Est ce que tu comprends un peu mieux cette notion de sens ? http://image.noelshack.com/fichiers/2020/15/1/1586189880-15861898652343109354405757399152.jpg Concernant les lentivirus, il s'agit effectivement d'un sous groupe de rétrovirus mais qui ont été modifiés par l'homme et sont ainsi non pathogènes car les séquences dangereuses de leur ADN ont été retirées et ils ont en plus une meilleure capacité de pénétration dans les cellules quiescentes post-mitotiques. Pour les séquences T7 et Sp6 du pcDNA3, il s'agit effectivement du site de liaison des ARN polymérases du phage T7 et de la salmonelle p6, avec le sens de la transcription indiqué mais je ne pense pas qu'on vous demandera ce genre de subtilités au concours Pour les vecteurs navettes, c'est effectivement leur fonction mais le professeur Levade n'avait pas détaillé plus que ça quand j'étais en PACES, mais comme la question précédente, ce sont des détails et tu ne seras jamais interrogé là dessus, Levade va plutôt chercher à vous faire réfléchir que réciter du cours dans les moindres détails ! Et pour finir avec les phages recombinants ! La grosse différence entre phages et plasmides, c'est que les phages sont des virus de bactéries, et nécessitent donc une étape d'encapsulation supplémentaire dans leur formation. La méthode d'insertion de l'insert est identique à celle utilisée dans la formation des plasmides. Il faut cependant constituer la capside qui englobe l'ADN du phage. Pour cela, on utilise des bactéries infectées par le phage mais dans un cycle qui n'est pas lytique : la bactérie produit sans être lysée les protéines de phage que l'on récupère pour former la Capside. Et on utilise d'autres bactéries, également pas dans un cycle lytique, pour répliquer l'ADN du phage. On récupère les ADN Phagiques produits, on les recombine avec l'insert et on associe cet ADN recombinant avec la capside que l'on produit en parallèle ! Le phage recombinant possède alors sa capacité d'infection. Est ce que c'est bon pour toi ? Bon courage ! Edited April 6, 2020 by dupuyadèle Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
OxyGenS Posted April 6, 2020 Author Share Posted April 6, 2020 il y a 12 minutes, dupuyadèle a dit : Est ce que tu comprends un peu mieux cette notion de sens ? Oui merci, entre tps j'ai aussi fait des qcm et c'est bon j'ai compris ! il y a 13 minutes, dupuyadèle a dit : Concernant les lentivirus, il s'agit effectivement d'un sous groupe de rétrovirus mais qui ont été modifiés par l'homme et sont ainsi non pathogènes car les séquences dangereuses de leur ADN ont été retirées et ils ont en plus une meilleure capacité de pénétration dans les cellules quiescentes post-mitotiques. Je crois que j'ai écrit une erreur dans mon cours, pour en avoir le coeur net : les rétrovirus sont utilisés en ayant été rendus inoffensifs mais eux ne peuvent pas se répliquer dans les cellules quiescentes alors que les lentivirus sont aussi inoffensifs mais ont la capacité de se multiplier dans les cellules quiescentes ? il y a 17 minutes, dupuyadèle a dit : Pour les séquences T7 et Sp6 du pcDNA3, il s'agit effectivement du site de liaison des ARN polymérases du phage T7 et de la salmonelle p6, avec le sens de la transcription indiqué mais je ne pense pas qu'on vous demandera ce genre de subtilités au concours Pour les vecteurs navettes, c'est effectivement leur fonction mais le professeur Levade n'avait pas détaillé plus que ça quand j'étais en PACES, mais comme la question précédente, ce sont des détails et tu ne seras jamais interrogé là dessus, Levade va plutôt chercher à vous faire réfléchir que réciter du cours dans les moindres détails ! Ok merci mais juste pour les vecteurs navettes, le fait de passer d'un hôte pro- à un hôte eucaryote : c'est une transduction ou une transfection ? (ou ça n'a pas de nom particulier ?) il y a 20 minutes, dupuyadèle a dit : Et pour finir avec les phages recombinants ! La grosse différence entre phages et plasmides, c'est que les phages sont des virus de bactéries, et nécessitent donc une étape d'encapsulation supplémentaire dans leur formation. La méthode d'insertion de l'insert est identique à celle utilisée dans la formation des plasmides. Il faut cependant constituer la capside qui englobe l'ADN du phage. Pour cela, on utilise des bactéries infectées par le phage mais dans un cycle qui n'est pas lytique : la bactérie produit sans être lysée les protéines de phage que l'on récupère pour former la Capside. Et on utilise d'autres bactéries, également pas dans un cycle lytique, pour répliquer l'ADN du phage. On récupère les ADN Phagiques produits, on les recombine avec l'insert et on associe cet ADN recombinant avec la capside que l'on produit en parallèle ! Le phage recombinant possède alors sa capacité d'infection. D'acc j'ai compris. Par rapport à l'insert que l'on met dans le phage, soit on l'ajoute en plus de l'ADN du phage, soit on enlève une partie de l'ADN du phage qu'on remplace par l'insert ? Dans le dernier cas, l'insert doit faire exactement la même taille que la partie de l'ADN du phage enlevée ? Dernière question : de façon générale, un vecteur n'est pas tjs un ADN bicaténaire circulaire ? Dans le cas du phage, il n'est pas circulaire ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
dupuyadèle Posted April 6, 2020 Share Posted April 6, 2020 il y a 3 minutes, OxyGenS a dit : Je crois que j'ai écrit une erreur dans mon cours, pour en avoir le coeur net : les rétrovirus sont utilisés en ayant été rendus inoffensifs mais eux ne peuvent pas se répliquer dans les cellules quiescentes alors que les lentivirus sont aussi inoffensifs mais ont la capacité de se multiplier dans les cellules quiescentes ? Oui, les rétrovirus ont été rendus inoffensifs mais ils ont une mauvaise capacité de pénétration dans les cellules quiescentes. Alors que les lentivirus beaucoup plus modifiés par l'homme pénètrent mieux les cellules quiescentes et sont encore plus innofensifs (retrait de plus de séquences, on ne garde vraiment que ce qui est nécessaire à la pénétration). Aucune idée pour le terme transfection transduction, garde le terme général de transfection dans le doute il y a 9 minutes, OxyGenS a dit : D'acc j'ai compris. Par rapport à l'insert que l'on met dans le phage, soit on l'ajoute en plus de l'ADN du phage, soit on enlève une partie de l'ADN du phage qu'on remplace par l'insert ? Dans le dernier cas, l'insert doit faire exactement la même taille que la partie de l'ADN du phage enlevée ? Soit tu fais une insertion simple comme avec un plasmide, soit tu retires des séquences (délétion-remplacement) pas très importantes pour le fonctionnement de ton phage ce qui permet d'augmenter la taille possible de ton insert puisque tu libères de la place. Dans ce cas, ton insert peut faire la taille d'un insert en insertion simple + la taille que tu as libéré en supprimant des séquences de l'ADN Phagique. il y a 13 minutes, OxyGenS a dit : Dernière question : de façon générale, un vecteur n'est pas tjs un ADN bicaténaire circulaire ? Dans le cas du phage, il n'est pas circulaire ? Je ne suis pas sûre à 100% pour ça mais je pense que ton vecteur peut avoir différentes formes, pas forcément bicatenaire mais aussi lineaire, et je pense que tu peux même avoir de l'ARN et non pas de l'ADN quand les vecteurs sont des virus à ARN. @Ratus, tu confirmes ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
OxyGenS Posted April 6, 2020 Author Share Posted April 6, 2020 @dupuyadèle Merci bcp pour ttes tes réponses, c'est bien plus clair mtn ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Ratus Posted April 7, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted April 7, 2020 @dupuyadèle En effet le vecteur n'est pas toujours ADN bicaténaire circulaire, ceci-étant on n'interroge pas sur autre chose au concours! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
OxyGenS Posted April 7, 2020 Author Share Posted April 7, 2020 Merci @Ratus pour la confirmation Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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