lauu Posted April 4, 2020 Share Posted April 4, 2020 Bonjour! Lorsque l'on utilise deux enzymes de restriction différentes qui sont à bouts collants, on utilise les polymérases ou exonucléases c'est ça? Et du coup dans ce cas là, le clonage sera orienté ou non orienté? merci d'avancee Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Claugomes3 Posted April 4, 2020 Solution Share Posted April 4, 2020 (edited) Bonjour @lau19, Attention, endonucléases, exonucléases et polymérases ne sont pas des synonymes! Chaque terme définit une activité enzymatique: -les polymérases sont des enzymes qui synthétisent des acides nucléiques (ADN ou ARN) -les exonucléases sont des enzymes qui coupent en bout de chaîne -les endonucléases sont des enzymes qui coupent en milieu de chaîne Les enzymes de restriction sont des endonucléases qui reconnaissent des séquences bien précises appelés sites de restriction (chaque enzyme de restriction reconnaît un site de restriction qui lui est spécifique). Lorsqu'une enzyme de restriction reconnait un site de restriction, elle coupera l'ADN au niveau des ponts phosphodiesters toujours sur le même site de clivage au sein du site de restriction. Lorsque l'on utilise 2 enzymes de restriction différentes (donc qui reconnaissent des sites de restriction différents), on a la formation d'extrémités à bouts collants cependant pour avoir un clonage orienté, il faut que les 2 extrémités formées soient compatibles pour qu'il y ait hybridation. Afin de respecter ceci, on utilise, normalement, 2 enzymes de restriction différentes qui sont à la fois présentes dans le plasmide à digérer et sur la cassette d'expression (dans le même ordre, par exemple BamH1 suivi de Pst1) afin qu'il puisse y avoir bien hybridation et que le plasmide se referme en incluant le gène à cloner. J'espère que se soit plus clair pour toi, si t'as besoin d'autres exemples pour illustrer ces notions, n'hésites pas à me relancer! Bon courage! Edited April 4, 2020 by Claugomes3 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
lauu Posted April 4, 2020 Author Share Posted April 4, 2020 okk mercii pour tes explications! mais du coup juste une petite précision pcq quand je faisais référence aux exonucléases et polymérases je voulais parler de ce passage du cours (désolé c'était pas très clair aha) je me demandais du coup si on utilisait ces enzymes pour pouvoir associer deux bouts différents, j'espere que ma question est plus claire Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Claugomes3 Posted April 4, 2020 Share Posted April 4, 2020 (edited) il y a 15 minutes, lau19 a dit : si on utilisait ces enzymes pour pouvoir associer deux bouts différents C'est bien ça, dans le premier cas, tu vois qu'après l'activité exonucléasique tu obtiens des bouts francs à partir de bouts collants. Dans le deuxième cas, la polymérase synthétise pour les extrémités les plus courtes la suite de la séquence en recopiant son complémentaire et on obtient des extrémités à bouts francs. Ces enzymes de modifications sont utilisés après les enzymes de restriction (endonucléases) lorsque cela favorise la stratégie de clonage (c'est un cas par cas selon le plasmide que tu utilises et la séquence que tu souhaites y insérer). J'espère avoir répondu à ta question! Edited April 4, 2020 by Claugomes3 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
lauu Posted April 5, 2020 Author Share Posted April 5, 2020 d'accord merci beaucoup! @Claugomes3 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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