dernière colle

[ClarisseV]

Bonjour, 

L'item E du QCM 5 me pose problème, je n'arrive pas à comprendre la correction, je ne comprends pas comment on fait pour trouver les valeurs… Si quelqu'un pouvait m'expliquer ce serait très sympa !

Et autre question,  est ce qu'une immunogénicité est forcément la résultante d'une antigénicité forte et inversement ?

Merciii !

Edited March 29, 2020 by ZinédineZidovudine

[AdamDeSagesse]

Hey !

Les résultats de l'électrophorèse permettent de déterminer le sens de l'ADNc que l'on veut inclure dans le vecteur. Rappel : comme on n'utilise qu'une seule enzyme de restriction, on se trouve dans une situation de clonage non orienté.

Pour pouvoir distinguer les différents sens, on utilise l'enzyme EcoRI qui coupe à l'intérieur de l'ADNc (il est important qu'il ne coupe pas en plein milieu car sinon, ce serait impossible puisque les fragments auraient la même taille : dans ce cas, il est situé à la 120 pb donc pas au milieu) et du vecteur.

 

Révélation

 

La zone entourée montre à quelle niveau l'ADNc est inclus dans le vecteur. Les trait vert montre à quel niveau Eco R1 coupe. J'ai représenté en rouge les 3 situations possibles, que l'on retrouve dans le résultat d'électrophorèse (que je t'invite à avoir sous les yeux).

 

1 : L'ADNc n'a pas été inclus dans le vecteur. Ainsi, si tu regardes la colonne B, tu t'aperçois qu'il n'y a qu'un fragment d'une taille de 9900 pb -> c'est le vecteur qui a été clivé au niveau de son site unique BamH1 (ne regarde pas la colonne E, c'est vraisemblablement un erratum, on aurait du avoir la même bande que cette de la colonne B).

 

2 : l'ADNc a été placé dans le mauvais sens. La colonne B révèle simplement que l'ADNc a été inclus -> on obtient 2 fragments car 2 sites BamH1 ( l'un sur le vecteur, l'un sur l'ADNc). 

Ce qui nous intéresse, c'est la colonne E. Pour déterminer la taille des fragments obtenus, on s'intéresse d'abord au nombre de base entre le site EcoRI du vecteur et BamH1 du vecteur aussi (là où, je le rappelle, a été inclus l'ADNc). On fait : 6750 - 4500 = 2250 pb

Ensuite, on trouve le nombre de base entre BamHI du vecteur (soit le début de l'ADNc) et le site EcoRI du l'ADNc. Comme l'ADNc est à l'envers, on commence à compter à partir de la 200ème base jusqu'à la 120ème (= site d'EcoR1), on obtient donc : 200-120 = 80

Au total, l'un des fragments libérés fait : 2250 + 80 = 2330 pb.

 

Pour calculer le second fragment, je te passe les détails mais on fait :  120 (le reste de l'ADNc) + 7650 (le reste du vecteur) = 7770 pb.

 

C'est bien ce qu'on retrouve dans les résultats.

 

3 : L'ADNc est bien placé, le raisonnement est le même que dans le précédent cas : 2250 + 120 (et pas 80 car comme c'est placé dans le bon sens, on compte de 0 jusqu'à 120) = 2370 pb.

 

L'autre fragment mesure donc : 80 + 7650 = 7730 pb.

 

C'est bien ce qu'on retrouve pour le clone III -> c'est donc celui-ci qu'il faut utiliser !

 

Si tu as du mal à lire l'échelle dans les résultats, il suffit de comparer : l'ADNc dans le bon sens a son plus petit fragment plus grand que le plus petit fragment de l'ADNc dans le mauvais sens -> l'ADNc dans le bon sens est donc le clone III (tu aurais aussi pu faire le même raisonnement mais avec le plus grand des 2 fragments).

 

Pour ta deuxième question :

L'antigénicité et l'immunogénicité sont 2 choses qu'il faut bien distingué : un élément peut avoir une forte antigénicité, et donc être facilement reconnu, mais ne pas entraîner de réponse immunitaire, et donc ne pas posséder une forte immunogénicité. Donc pour répondre de manière simple à ta question : non !

 

Voilà, j'espère que c'est clair, bonne journée et bon courage !

Edited March 29, 2020 by AdamDeSagesse

[ClarisseV]

Merci énormément @AdamDeSagesse pour ta réponse claire et détaillée !

Bonne fin d'après-midi !