Ancien Responsable Matière Jadilie Posted March 27, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted March 27, 2020 (edited) Coucou ! Je ne comprends pas pourquoi la B est fausse. La correction dit que c'est parce que les XTP* ne s'incorporeront pas à l'ADN. Mais il restera l'ADN de départ, avec lequel la sonde pourra s'hybrider, même si on ne pourra pas le révéler non ? Je ne comprends pas pourquoi l'A3 C "Le manipulateur peut n’avoir oublié que l’étape de digestion par l’enzyme HindII." est vraie : si le manipulateur oublie cette étape, notre ADN est entier, donc il devrait être totalement éliminé lors de l'étape de gel filtration vu qu'on n'a aucun fragment plus petit que 15 kb non ? Ici je ne comprends pas pourquoi la E est fausse : on obtiendra d'un côté un site 5'...A/GATCA...3' et de l'autre un site 5'...T/GATCT...3', et aucun n'est le site de P2 non ? La cassette Néo c'est bien une sélection positive, vu que les souris qui l'ont survivent ? La B est comptée vraie.. Après ajout du NaCl c'est plus l'éluat ? Merci au héros / à l'héroïne qui aura le courage de répondre à tout ça ! Ou à ceux qui répondront à une partie Edited March 27, 2020 by Jadilie Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted March 27, 2020 Share Posted March 27, 2020 Coucou @Jadilie Il y a 3 heures, Jadilie a dit : Je ne comprends pas pourquoi la B est fausse. La correction dit que c'est parce que les XTP* ne s'incorporeront pas à l'ADN. Mais il restera l'ADN de départ, avec lequel la sonde pourra s'hybrider, même si on ne pourra pas le révéler non ? Ce qui rend faux cet item c'est la différence entre ADN et ARN à savoir les dNTP/NTP mais également les bases azotées U et T (l'une dans l'ARN l'autre dans l'ADN) ainsi une sonde qui reconnait l'ARNm ne reconnaitra pas la séquence d'ADN correspondante (et puis il y a aussi le système d'épissage alternatif qui peut entrer en jeu et faire apparaitre une séquence reconnue par la sonde sur l'ARNm mais initialement absente sur l'ADN génomique) , c'est ce qu'essaye de dire la correction je présume Il y a 4 heures, Jadilie a dit : Je ne comprends pas pourquoi l'A3 C "Le manipulateur peut n’avoir oublié que l’étape de digestion par l’enzyme HindII." est vraie : si le manipulateur oublie cette étape, notre ADN est entier, donc il devrait être totalement éliminé lors de l'étape de gel filtration vu qu'on n'a aucun fragment plus petit que 15 kb non ? Tu as raison oui L'autre truc qui me dérange c'est qu'au niveau de l'expérience avec le protocole correctement réalisé, la bande du bas n'a pas trop de raison d'exister étant donné qu'elle devrait être dégradée par les endonucléases (la séquence d'ADN n'est plus protégée par la protéine P152 vu que celle-ci ne plus se lier après action de HindII). Il y a 4 heures, Jadilie a dit : Ici je ne comprends pas pourquoi la E est fausse : on obtiendra d'un côté un site 5'...A/GATCA...3' et de l'autre un site 5'...T/GATCT...3', et aucun n'est le site de P2 non ? Je suis encore d'accord avec toi , si on fait la construction ça donne ça : 5' TGATCT 3' <-----P1 P2----> 3' ACTAGA 5' On voit bien que l'on obtient pas de site attaquable par ¨P2. Après c'est peut-être un piège du genre "P2 ne libèrera pas l'insert mais il peut exister d'autres sites de restriction pour P2 (il n'est pas dit qu'il existe un site unique) au sein du plasmide et dans ce cas le plasmide pourra être coupé et donc on ne peut pas affirmer que le plasmide ne sera pas coupé" ... mais bon si c'est ça , c'est super fourbe Il y a 4 heures, Jadilie a dit : La cassette Néo c'est bien une sélection positive, vu que les souris qui l'ont survivent ? Yup tout à fait Il y a 4 heures, Jadilie a dit : La B est comptée vraie.. Après ajout du NaCl c'est plus l'éluat ? Là c'est pas le NaCl qui est concerné, on utilise une chromatographie par échange de cations du coup tout ce qui est chargé négativement sera retenu sur la colonne et tout ce qui est chargé positivement sera élué. Aussi, les protéines ayant un pHi <pH seront chargées positivement et inversement elles seront chargées - quand leur pHi >pH ..c'est logique vu que quand on augmente le pH ça devient de moins en moins acide ce qui équivaut à retirer de plus en plus d'ion H+ et donc à rendre la prot de plus en plus chargée négativement. Du coup ici les prots ayant un pHi<pH seront chargées + et ne seront pas retenues par la colonne (éluées donc) tandis que celles ayant un pHi>pH seront encore retenues sur la colonne. En espérant t'avoir aidée Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Jadilie Posted March 27, 2020 Author Ancien Responsable Matière Share Posted March 27, 2020 il y a 3 minutes, Metallica a dit : Ce qui rend faux cet item c'est la différence entre ADN et ARN à savoir les dNTP/NTP mais également les bases azotées U et T (l'une dans l'ARN l'autre dans l'ADN) ainsi une sonde qui reconnait l'ARNm ne reconnaitra pas la séquence d'ADN correspondante (et puis il y a aussi le système d'épissage alternatif qui peut entrer en jeu et faire apparaitre une séquence reconnue par la sonde sur l'ARNm mais initialement absente sur l'ADN génomique) , c'est ce qu'essaye de dire la correction je présume Il était précisé que le gène n'avait pas d'introns. Et étant donné que T et U sont équivalents, dans le sens où ils s'apparient tous deux avec A, je ne vois pas ce que ça change.. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted March 27, 2020 Share Posted March 27, 2020 il y a 8 minutes, Jadilie a dit : Il était précisé que le gène n'avait pas d'introns. Et étant donné que T et U sont équivalents, dans le sens où ils s'apparient tous deux avec A, je ne vois pas ce que ça change Ah ui ben du coup chépas mdr Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Jadilie Posted March 27, 2020 Author Ancien Responsable Matière Share Posted March 27, 2020 il y a 5 minutes, Metallica a dit : Là c'est pas le NaCl qui est concerné, on utilise une chromatographie par échange de cations du coup tout ce qui est chargé négativement sera retenu sur la colonne et tout ce qui est chargé positivement sera élué. Aussi, les protéines ayant un pHi <pH seront chargées positivement et inversement elles seront chargées - quand leur pHi >pH ..c'est logique vu que quand on augmente le pH ça devient de moins en moins acide ce qui équivaut à retirer de plus en plus d'ion H+ et donc à rendre la prot de plus en plus chargée négativement. Du coup ici les prots ayant un pHi<pH seront chargées + et ne seront pas retenues par la colonne (éluées donc) tandis que celles ayant un pHi>pH seront encore retenues sur la colonne. Oui mais avec le NaCl on récupère des protéines qui étaient retenues à la base. Est-ce qu'on considère que ces protéines ne sont pas dans l'éluat ? Parce que si elle ont un pHi inférieur à 8 je ne vois pas pourquoi elles sont retenues au début.. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Metallica Posted March 27, 2020 Solution Share Posted March 27, 2020 il y a 7 minutes, Jadilie a dit : Oui mais avec le NaCl on récupère des protéines qui étaient retenues à la base. Est-ce qu'on considère que ces protéines ne sont pas dans l'éluat ? Parce que si elle ont un pHi inférieur à 8 je ne vois pas pourquoi elles sont retenues au début.. Oups j'ai encore dit une bétise, ben du coup ouais ça devrait etre l'inverse Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Jadilie Posted March 27, 2020 Author Ancien Responsable Matière Share Posted March 27, 2020 Oki ! Merci beaucoup !!! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Recommended Posts
Join the conversation
You can post now and register later. If you have an account, sign in now to post with your account.
Note: Your post will require moderator approval before it will be visible.