foramen Posted March 24, 2020 Share Posted March 24, 2020 bonjour j'ai un petit problème avec l'item D je vois pas comment on peut savoir si il est dans le bon sens pcq si on digère la construction avec BamH1 on obtient 1 seul fragment et donc qu'il soit a l'envers ou a l'endroit a l'electro on fera pas la différence je me trompe ? Mercii ( l'item est compté juste) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted March 24, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted March 24, 2020 Salut @foramen ! L'item est bien vrai ! Il aurait été faux si l'on avait coupé par HindIII ! En fait ici tu te retrouves avec ton ADNc dans le plasmide 1, sauf que comme tu le dis il peut se mettre dans le sens ATG --> TGA (OK) ou TGA --> ATG (PAS OK). Pour vérifier tu dois couper le plasmides par une enzyme de restriction qui va couper l'ADNc inséré mais absolument pas au milieu de ce dernier ! En effet si tu coupe au milieu tu ne vas pas pouvoir savoir dans quel sens il était. Ici couper par BamH1 permet l'obtention de fragment différents selon le sens d'insertion, et donc une identification du sens d'insertion avec. le nombre de résidus coupés et leur nombre de paire de base. Tu comprend ou c'est pas super clair ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Man-ondansétron Posted March 24, 2020 Solution Share Posted March 24, 2020 (edited) Bonjour Oui je suis d’accord avec toi il y a un seul site de restriction BamH1 présent sur le plasmide (une fois qu’il a intégré l’ADNc). On peut vérifier l’insertion ou non de l’ADNc mais pas son sens d’insertion: pour ça il faudrait un autre site BamH1 ce qui permettrait d’avoir 2 fragments de tailles variables en fonction du sens d’insertion. Est-ce un QCM du tutorat ? il y a 4 minutes, Lami_Molette a dit : Salut @foramen ! L'item est bien vrai ! Il aurait été faux si l'on avait coupé par HindIII ! En fait ici tu te retrouves avec ton ADNc dans le plasmide 1, sauf que comme tu le dis il peut se mettre dans le sens ATG --> TGA (OK) ou TGA --> ATG (PAS OK). Pour vérifier tu dois couper le plasmides par une enzyme de restriction qui va couper l'ADNc inséré mais absolument pas au milieu de ce dernier ! En effet si tu coupe au milieu tu ne vas pas pouvoir savoir dans quel sens il était. Ici couper par BamH1 permet l'obtention de fragment différents selon le sens d'insertion, et donc une identification du sens d'insertion avec. le nombre de résidus coupés et leur nombre de paire de base. Tu comprend ou c'est pas super clair ? Bonjour, Pour obtenir des fragments différents selon le sens d’insertion il faudrait qu’il y ait un site BamH1 sur le plasmide pHIGFP (en plus de celui sur l’ADNc) or je n’en vois pas, peut être qu’on a simplement oublié de le mettre Edited March 24, 2020 by Man-ondansétron Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted March 24, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted March 24, 2020 (edited) @Man-ondansétron @foramen Je suis allé bien trop vite, effectivement on ne saura que s'il est présent et pas s'il est bien orienté. Méa Culpa Edited March 24, 2020 by Lami_Molette Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
foramen Posted March 24, 2020 Author Share Posted March 24, 2020 @Lami_Molette il y a 5 minutes, Lami_Molette a dit : ouais c'est un qcm du tat poly 2 paques de l'année dernière sujet 2 je crois Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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