carolineb Posted March 7, 2020 Share Posted March 7, 2020 (edited) Bonjour - j'ai une question par rapport au transfert de gène par l'intermédiaire de cellules ES, si on voulait un animal transgénique homozygote il faudrait croiser 2 souris chimériques? et cette méthode ne permet pas de cibler un gène en particulier si? - aussi concernant la mutagenèse ciblée je ne comprends pas trop comment on peut savoir que les cellules qui possèdent la cassette de sélection négative sont celles qui n'ont pas fait de recombinaison homologue? je sais pas si je suis claire.. en fait je vois pas bien comment on peut différencier les cellules qui ont fait une recombinaison et celles qui n'en ont pas fait avec ces cassettes Edited March 7, 2020 by carolineb Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Reïner Posted March 8, 2020 Solution Share Posted March 8, 2020 (edited) @carolineb Il y a 8 heures, carolineb a dit : et cette méthode ne permet pas de cibler un gène en particulier si? Si justement on fait en sorte que le transgène soit le plus apparenté possible au gène que l'on veut invalider de telle sorte que la recombinaison puisse se faire. Il y a 8 heures, carolineb a dit : j'ai une question par rapport au transfert de gène par l'intermédiaire de cellules ES, si on voulait un animal transgénique homozygote il faudrait croiser 2 souris chimériques? https://forum.tutoweb.org/topic/38797-croisement-souris-chimériques/ Ce sujet a traité de ça Théoriquement on pourrait mais les combinaisons entre les deux chimères sont assez nombreuses et il est à mon sens plus simple de passer par les croisements présentés dans le TD et dans le cours pour avoir une plus grande probabilité d'obtenir des homozygotes transgéniques. Après c'est possible mais il faudrait comme pour les croisements successifs présentés, des techniques permettant d'identifier les animaux transgéniques par d'autres moyens que la couleur. Il y a 8 heures, carolineb a dit : aussi concernant la mutagenèse ciblée je ne comprends pas trop comment on peut savoir que les cellules qui possèdent la cassette de sélection négative sont celles qui n'ont pas fait de recombinaison homologue? je sais pas si je suis claire.. en fait je vois pas bien comment on peut différencier les cellules qui ont fait une recombinaison et celles qui n'en ont pas fait avec ces cassettes On fait en sorte que seul le gène de résistance à la néomycine soit présent dans le segment d'ADN qui est homologue au segment de l'ADN génomique. Comme ça lors de la recombinaison des segments homologues (apparentés) , le chromosome aura intégré la cassette de résistance à la néomycine en se débarrassant par la même occasion de la cassette de sensibilité au gancyclovir. Du coup lors de la double sélection au gancyclovir et à la néomycine , seules les cellules ayant intégré le transgène au bon endroit pourront survivre. Edited March 8, 2020 by Reïner Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
carolineb Posted March 8, 2020 Author Share Posted March 8, 2020 Il y a 6 heures, Reïner a dit : Si justement on fait en sorte que le transgène soit le plus apparenté possible au gène que l'on veut invalider de telle sorte que la recombinaison puisse se faire. @Reïner mais vu qu'on prend des cellules de la masse cellulaire interne j'ai du mal à voir comment on peut cibler un gène.. sinon merci bcp j'ai bien compris pour le reste! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Reïner Posted March 8, 2020 Share Posted March 8, 2020 Il y a 6 heures, carolineb a dit : mais vu qu'on prend des cellules de la masse cellulaire interne j'ai du mal à voir comment on peut cibler un gène.. Tu injectes ta construction génique dans les cellules de la masse cellulaire interne Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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