KBenz9 Posted March 7, 2020 Share Posted March 7, 2020 Saluut, Voilà je ne comprend pas bien comment résoudre ce qcm, en particulier pour le calcul de la taille du vecteur. Est-ce que quelqu'un pourrait m'éclairer svp ? Merci beaucoup !! https://www.casimages.com/i/200307011834200042.png.html Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
zoemayyr Posted March 7, 2020 Share Posted March 7, 2020 Saluuut @bkte! Est ce que tu pourrai juste me préciser les réponses des items stp ? Pour que je sois sure de pas te dire de bêtises Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution zoemayyr Posted March 7, 2020 Solution Share Posted March 7, 2020 re salut ! Du coup je n'avais pas fait gaffe au titre de ton post, mais finalement j'ai trouvé la correction, donc je vais essayer de compléter la correction de la colle mais je garantis rien. la mise en présence du plasmide et de l'ADNc avec BAM-H1 va permettre de : - couper le plasmide au niveau des deux sites de clivage BAm-H1 du polilinker et ainsi de libérer deux plasmides (image1) - couper l'ADNc de l'antithrombine au niveau des deux flèches indiquant BAM-H1, libérant ainsi un insert de 1,41kb. Ensuite la mise en présence de ligases permettra de donner (entre autres) le plasmide ayant intégré l'ADNc créant ainsi un vecteur recombinant de 6,48kb. (je dis entre autres car il y'a différentes options, elles sont expliquées dans la correction "officielle" de l'item C) du coup : item A : vrai En effet le gène AmpiR de résistance à l'ampicilline est présent sur le plasmide = seules les bactéries ayant ingéré le plasmide seront résistantes à l'ampicilline. Item B : faux Le vecteur recombinant sera formé par la liaison de l'insert (1,41kb) avec le plasmide ouvert (5,07kb car on a coupé la portion présente entre les deux sites reconnus par BAM-H1, on a donc "enlevé" 0,43kb au plasmide d'origine). Donc le vecteur recombinant fera 6,48kb. Item voir correction Item vrai La colonne de Nickel reconnaît bien l'étiquette 6His (et est bien éluee avec de l'imidazole ) et il y a bien une étiquette 6His dans le plasmide. Ainsi, lors de la traduction du vecteur il y aura ajout d'une étiquette 6His à l'antithrombine ce qui permettra sa purification sur colonne de nickel. Item E : faux Pour vérifier que l'insert a été ajouté dans le bon sens il faut utiliser une enzyme de restriction coupant en deux points le vecteur recombinant : - dans la séquences codante (pas au milieu!!!) - autre part dans le plasmide. Dans ce cas on obtiendra deux fragments de longueur différente selon le sens d'insertion. (Je vais essayer de faire un schémas d'explication -> image 2). Ce n'est pas le cas de BAM-H1 : en utilisant BAM-H1 on reviendra à la situation de départ c'est à dire l'insert d'un côté, le plasmide ouvert de l'autre. Voila j'espère que ça pourra t'aider, si je peux éclaircir ça encore un peu n'hésite pas. (Je vais essayer de rajouter les images mais je suis pas trop douée avec ça haha). Bon courage à toi ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
KBenz9 Posted March 7, 2020 Author Share Posted March 7, 2020 Merci pour ta réponse c'est gentil ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
zoemayyr Posted March 8, 2020 Share Posted March 8, 2020 Avec plaisir, désolé je n'arrive pas a rajouter les images Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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