Enzymes compatibles

[Please]

Bonjour !!

Je n'arrive pas a déterminer quand des enzymes de restriction peuvent se ré-apparier entre elles ou non... Je sais que c'est une histoire de compatibilité entre séquences mais je n'arrive pas à comprendre, est-ce que quelqu'un pourrait me faire un petit récap de la méthode depuis le début ça serait vraiment super, merci beaucoup !!

[Puromycine]

Salut ! ^^

 

Alors, c'est en effet un histoire de compatibilité des séquences coupées.

 

En gros, il faut que les séquences "libres" soit strictement identiques : la même séquences, dans le même sens, et coupé pareil.

Par exemple : EcoRI coupe 5'-G/AATTC-3' (la partie en rouge est le bord libre la coupure)

                                                 3'-CTTAA/G-5'

MfeI coupe 5'-C/AATTC-3'

 

TatGI coupe 5'-AAATT/T-3'

 

BstTI coupe 5'-C/TTAAG-3'

                       3'-GAATT/C-3'

 

EcoRI et MfeI sont strictement identique : donc si on coupe l'insert avec EcoRI et le plasmide avec MfeI, l'insert pourra s'insérer dans le plasmide.

En revanche, EcoRI et TatGI ne sont pas tout à fait identique : bien que le bord libre soit le même, la coupure ne se fait pas au même endroit (elle se fait en 5' au niveau de EcoRI et en 3' au niveau de TatGI). Donc, si on coupe l'insert avec EcoRI et le plasmide avec TatGI, l'insert ne pourra PAS s'insérer dans le plasmide.

 

Aussi, TatGI et BstI ne peuvent pas être associé pour insérer l'insert car on n'est pas sur le même brin.

 

 

Ce que je faisais du coup, c'était surligner les bouts libres de la même couleur s'il étaient strictement identique (comme ce que j'ai fait en exemple). Ainsi, je notait visuellement sans avoir a réécrire tout le temps les séquences des enzyme de restrictions.

Après si tu as peur de te tromper en surlignant, tu peux comparer à chaque item les enzymes entres elles. C'est plus long, mais c'est moins risqué.

 

Je ne sais pas si j'ai dissipé toutes tes interrogations, donc n'hésite pas à me relancer si tu as le moindre doute !

 

Bon courage

 

 

 

[Théophylline]

Salut @Please ! C'est plus clair pour toi ? 

[Please]

Il y a 23 heures, Puromycine a dit :

Salut ! ^^

 

Alors, c'est en effet un histoire de compatibilité des séquences coupées.

 

En gros, il faut que les séquences "libres" soit strictement identiques : la même séquences, dans le même sens, et coupé pareil.

Par exemple : EcoRI coupe 5'-G/AATTC-3' (la partie en rouge est le bord libre la coupure)

                                                 3'-CTTAA/G-5'

MfeI coupe 5'-C/AATTC-3'

 

TatGI coupe 5'-AAATT/T-3'

 

BstTI coupe 5'-C/TTAAG-3'

                       3'-GAATT/C-3'

 

EcoRI et MfeI sont strictement identique : donc si on coupe l'insert avec EcoRI et le plasmide avec MfeI, l'insert pourra s'insérer dans le plasmide.

En revanche, EcoRI et TatGI ne sont pas tout à fait identique : bien que le bord libre soit le même, la coupure ne se fait pas au même endroit (elle se fait en 5' au niveau de EcoRI et en 3' au niveau de TatGI). Donc, si on coupe l'insert avec EcoRI et le plasmide avec TatGI, l'insert ne pourra PAS s'insérer dans le plasmide.

 

Aussi, TatGI et BstI ne peuvent pas être associé pour insérer l'insert car on n'est pas sur le même brin.

 

 

Ce que je faisais du coup, c'était surligner les bouts libres de la même couleur s'il étaient strictement identique (comme ce que j'ai fait en exemple). Ainsi, je notait visuellement sans avoir a réécrire tout le temps les séquences des enzyme de restrictions.

Après si tu as peur de te tromper en surlignant, tu peux comparer à chaque item les enzymes entres elles. C'est plus long, mais c'est moins risqué.

 

Je ne sais pas si j'ai dissipé toutes tes interrogations, donc n'hésite pas à me relancer si tu as le moindre doute !

 

Bon courage

 

 

 

Whaouh c'est génial merci beaucoup beaucoup !!!