Léaaa Posted February 20, 2020 Share Posted February 20, 2020 Bonsoir, je n'arrive à trouver le calcul à faire pour la C... Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Julianne Posted February 20, 2020 Solution Share Posted February 20, 2020 (edited) Salut, Ne t'inquiète pas c'est très simple mais il ne faut pas s'embrouiller dans les plasmides et enzymes utilisées! Je te conseille de faire ces exos en 3 étapes: calculer la séquence à insérer après action des enzymes, calculer la longueur du plasmide receveur après action des enzymes puis enfin calculer la longueur du plasmide recombinant en additionnant les 2! 1. Alors tout d'abord on s'intéresse au plasmide contenant le promoteur à récupérer (pProm) et tu vois que l'enzyme BamH1 va cliver à 800 et l'enzyme Pst1 va cliver à 1500 et qu'au milieu il va y avoir notre promoteur donc c'est cette séquence qu'on va récupérer: pour calculer sa longueur il suffit de faire 1500-800 = 700 pb. 2. Ensuite, on s'intéresse au plasmide "receveur" et on voit que l'enzyme BamH1 va le cliver à 1300 et l'enzyme Pst1 va le cliver à 1350 donc cette séquence (qui fait 50 pb) va être ôtée au plasmide afin de créer une ouverture où va pouvoir s'insérer le promoteur récupéré sur pProm. De ce fait le plasmide "receveur" va perdre cette portion donc il mesurera: 5200 - 50 = 5150 pb. 3. Enfin, on va venir insérer le promoteur grâce à la ligase donc le plasmide "ouvert" de 5150 pb va recevoir le promoteur qu'on a récupéré précédemment qui mesurait 700 pb donc le plasmide recombinant fait 5150+700 = 5850 pb! En espérant ne pas t'avoir embrouillée et que ce soit plus clair! Si jamais tu n'as pas compris n'hésite pas à me le dire! Oups je n'ai pas bien lu l'item du C! En fait tous les calculs au-dessus doivent être fait pour répondre mais ensuite il faut regarder si ton plasmide recombinant peut être clivé par BamH1 ce qui n'est pas le cas puisque le promoteur ne contient pas de site de clivage pour l'enzyme, et le plasmide receveur après insertion du promoteur non plus donc tu as bien un fragment de 5850 pb. Edited February 20, 2020 by Julianne Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Léaaa Posted February 21, 2020 Author Share Posted February 21, 2020 @Julianne Merci beaucoup c'est super clair ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
meds Posted April 13, 2020 Share Posted April 13, 2020 Bonjour @Julianne j’ai juste une question si ça te dérange pas du coup je me demandais si la C était vraie ou fausse du coup ? Est ce qu’elle est fausse parce que bamH1 n’est pas après le promoteur ou est ce qu’elle est vraie parce que ils nous disent qu’on obtient un seul fragment mais dans ce cas la je comprend pas trop comment le plasmide aurait pu l’intégrer sachant que ça n’est pas après le promoteur (ou peut être que ça coupe quand meme meme si l’enzyme n’est pas à sa place ?) breeef je suis un peu perdu je pense que ça se voit merci énormément pour ton aide par avance Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Julianne Posted April 13, 2020 Share Posted April 13, 2020 Bonjour @meds, Pas de soucis ne t’inquiète pas! Ces QCM sont fait pour embrouiller l’esprit mais ils ne sont pas si compliqués! Une fois que tu as ton plasmide recombinant (avec ton promoteur inséré) tu regardes combien de sites de clivage par l’enzyme BamH1 il y a (peu importe où ils se trouvent dans le plasmide, l’enzyme coupera que ce soit sur un promoteur ou pas). Dans ce cas là, tu remarques qu’il n’y a pas de site de clivage par BamH1 sur le plasmide ni sur le promoteur inséré donc elle n’agira pas sur le plasmide (donc il reste bien en 1 fragment qui fait 5850 pb). Je sais pas si c’est plus clair pour toi? N’hésite pas sinon!! Bon courage et bon WE de Pâques!! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
meds Posted April 13, 2020 Share Posted April 13, 2020 @Julianne Oui je suis desolé j’ai du mal avec ce genre de choses ce que je comprend pas c’est que pour moi dans ma tête y’a deux options - soit la séquence est integré dans le plasmide et à ce moment la on a un de 5850 et un autre de 700 - soit on l’a pas intégrer mais dans ce cas il est « intact » et donc on obtient un seul fragment de 5200 j’arrive pas a comprendre comment il l’aurais pu l’intégrer sans obtenir 2 fragments meme si il le site de restriction n’est pas au bon endroit peut être que je me trompe totalement dans ce cas j’en suis désolé merci pour le temps que tu m’accorde Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Julianne Posted April 18, 2020 Share Posted April 18, 2020 @meds Pas de soucis ne t'en fais pas, j'ai fais un petit schéma pour que ce soit plus clair! En rouge, tu as le promoteur de pProm et en vert tu as le plasmide "plaminine". Tout d'abord, on clive pProm pour avoir le promoteur, puis on ouvre le plasmide receveur (et il perd une séquence de 50 pb puisqu'entre BamH1 et Pst1 il y a 50 pb). On insère ensuite le promoteur qui fait 700 pb. Les sites de clivage des enzymes qui ont été utilisés (pour ouvrir le plasmide receveur mais également ceux pour récupérer le promoteur) ne sont plus présents sur le plasmide recombinant puisqu'ils ont été utilisés. De ce fait, le plasmide recombinant ne possède plus de site de clivage ni pour BamH1 ni pour Pst1 donc on n'a bien un seul fragment en présence de l'enzyme BamH1. @Léaaa on est d'accord que l'item C était compté vrai s'il te plaît? (au cas où!!!) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
meds Posted April 18, 2020 Share Posted April 18, 2020 C’est parfait merci énormément @Julianne Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Julianne Posted April 18, 2020 Share Posted April 18, 2020 @meds Si jamais quelque chose reste flou n’hésite vraiment pas à demander!! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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