Cantonaise Posted October 23, 2014 Share Posted October 23, 2014 Bonjour Dans le cours de M. Cussac aujourd'hui sur la diapo 15 lorsqu'il parles de l'histo enzymologie je ne comprends pas le rôle des esterase ( en s'esterfiant elle rend la calceine fluorescente, "et alors" ? en quoi sa montre l'activité enzymatique ) et de la peroxydase. Merci Link to comment Share on other sites More sharing options...
LouM Posted October 23, 2014 Share Posted October 23, 2014 Alors j'ai noté ça : 2. Histoenzymologie On met en évidence une activité enzymatique. Les estérases : on prend de la calcéine AM non fluo, elle pénètre dans les C, et elle va être estérifiée et va devenir fluo ! Cela reflète l'activité estérasique, notamment dans la mise en évidence de la viabilité CR. Les péroxydases : granulocytes neutrophiles, éosinophiles, Ac secondaires couplées au péroxydases et eau oxygénée. On a une oxydation de la diaminobenzidine et on obtient un précipité brun. Donc en gros d'après ce que je comprends ce sont des substances qui une fois intégrées dans la C, si elles réagissent (en devenant fluorescente ou en formant des précipités), c'est qu'elles ont subit une activité enzymatique, et donc que la cellule est vivante. C'est basique mais c'est juste pour montrer la viabilité cellulaire... Après il est passé très vite sur cette partie donc ça ne doit pas être + développé que ça à mon avis ! mais si quelqu'un a compris autre chose, qu'il le fasse partager Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Sophie1 Posted October 23, 2014 Solution Share Posted October 23, 2014 Bonjour, En fait la calceine AM est un substrat non fluorescent a la base que l'on fait entrer dans la cellule où elle va être estérifiée, c'est cette estérification qui la rend fluorescente (et qui l'empêche aussi de ressortir de la cellule). Donc si on détecte de la calcéine fluorescente cela signifie qu'il y a une activité enzymatique des esterases de la cellule (d'où l'utilisation pur faire un test de viabilité cellulaire) Pour la péroxydase on met du péroxyde d'hydrogène (H2O2)en présence de péroxydase et on ajoute un substrat qui est la diaminobenzidine, le substrat est alors modifié et forme un précipité brun. J'espère que c'est un peu plus clair sinon n'hésite pas à demander des précisions. Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sophie1 Posted October 23, 2014 Share Posted October 23, 2014 Désolée LouM j'étais en train de répondre je n'avais pas vu que tu avais été plus rapide ! Link to comment Share on other sites More sharing options...
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