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Re @n---

 

Quand un Ag protéique est sous forme native , ça sous-entend qu'il a adopté sa conformation tridimensionnelle. A partir de là , certains épitopes seront directement accessibles et d'autres ne le seront pas du fait de la structures tertiaires ( replis dus à des liaisons diverses telles que disulfures , ioniques , hydrogènes , hydrophobes..) et la quaternaire ( partenaire moléculaire).

 

On regardant cette phrase-ci :

 

mzbp.png

 

On peut comprendre que l'item est vrai car si l'épitope n'était pas accessible , on n'aurait pas réussi à sélectionner l'hybridome IV.

 

Et pour ce qui est de l'extrait protéique ,en immunoprécipitation (technique qui épargne la forme native de l'Ag) ,  on te dit qu'avec l'Ac III , il y a une bande à 75kDa , PM qui rappelle celui de l'AgM. A partir de là , tu peux en conclure que l'épitope reconnu par cet Ac est accessible sous la forme native. de l'Ag M.

 

 

Qcm 4 :

 

Item A : On te dit qu'en immunoprécipitation , l'Ac I reconnait une bande à 75kDa et à 40kDa donc on ne pourra pas faire d'évaluation semi-quantitative de l'AgM( 75kDa) puisque la protéine à 40kDa également détectée par l'Ac I viendra tout perturber.

 

Item C : Pour les cellules libérant des Ag , on pourra utiliser les mêmes étapes qu'un ELISA sandwich lors de notre ELISpot  :

-Un Ac lié à un support solide

-L'Ag M sécrété par les cellules viendra se fixer à l'Ac fixé sur support solide

-Un deuxième Ac marqué viendra se fixer sur l'AgM

Après lavage permettant d'enlever les cellules et le surnageant :

- Révélation des spots crées par les signaux émis par les molécules couplé au 2ème Ac , spots qui permettront de deviner la forme des cellules qui étaient précédemment présentes.

 

Pour que cette technique soit possible , il nous faut les 2 Ac appropriés pour faire cette expérience. Une notion importante pour les étapes de l'elisa sandwich , c'est qu'il faut que les deux épitopes reconnus par les 2 Ac utilisés soient différents sinon on aurait potentiellement une perturbation du signal par diminution de la liaison entre l'Ac marqué et l'Ag.

Le plus simple dans ce cas là c'est de trouver un Ac reconnaissant un épitope séquentiel de l'Ac M et un autre Ac reconnaissant un épitope conformationnel de l'AgM comme ça automatiquement on sera sur que les épitopes seront différents..les Ac II et IV reconnaissent respectivement un épitope séquentiel ( bande à 75kDa en immunotransfert et immunoprécipitation ) et conformationnel ( bande à 75kDa uniquement en immunoprécipitation)  donc ça sera parfait !

 

En revanche les Ac II et III permettent de voir une bande à 75kDa aussi bien en immunoprécipitation qu'en immunotransfert. Ceci pose un problème car on n'a pas la certitude que ces 2 Ac ne correspondent pas à un seul et même type d'Ac qui reconnaitrait alors un seul épitope ce qui perturberait le dosage par ELISA sandwich. Après il est possible que ces 2 Ac ne reconnaissent pas les mêmes épitopes mais dans le doute, il est plus judicieux d'utiliser les 2 Ac mentionnés dans l'item D car l'on est sur qu'ils ne reconnaissent pas le même épitope

---> item E faux

 

QCM 5 :

 

item A : Qui dit in vivo , dit implicitement forme native de la protéine or on te dit qu'en immunoprécipitation , on observe des bandes pour tous les Ac utilisés ( dont l'Ac IV) donc l'Ac IV reconnaitra effectivement l'AgM in vivo

 

Item B : On te dit au début que les Acm produits proviennent de souris ! Sachant que l'on va chercher à injecter ces Ac (certainement couplés à des toxines) dans un etre humain pour détruire la tumeur rénale ,si on injecte à de multiples reprises ces Ac "étrangers" à l'organisme humain , il va finir par y avoir une réaction immune chez la personne , mobilisant des Ac anti Ac de souris qui finiront logiquement par  être inefficaces ( puisque détruits)

 

 

Edited by Metallica
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