Ancien Responsable Matière Tacocat Posted February 10, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted February 10, 2020 (edited) Salut à tous ! Nous avons vu un exemple en cours où, dans un plasmide, un promoteur eucaryote était placé devant un gène procaryote de résistance à un antibiotique. Je pensais pourtant qu'il fallait un promoteur procaryote devant ces gènes. Est-ce que quelqu'un saurait m'expliquer pourquoi ? (La prof a dit en cours que la résistance serait pour des cellules eucaryote, mais ça m'avance pas beaucoup) Je rajoute une question au passage, pour ce qui concerne la carte de restriction d'une séquence, il faut choisir une enzyme qui coupe avant l'ATG et une enzyme qui coupe après l'ATG mais pour la deuxième, il faut quand même que la séquence soit coupée après le TGA pour pouvoir conserver le cadre de lecture ouvert, je me trompe ? Merci d'avance pour vos réponses ! Edited February 10, 2020 by VBL Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Croziflette_Claquette Posted February 10, 2020 Solution Share Posted February 10, 2020 Salut, alors d'abord on a encore rien vu de pratique, tout va s'éclaircir rapidement. Elle parle de gene de résistance à un antibiotique procaryote car il est obtenu chez eux mais il n'empêche que si tu veux l'exprimer chez un eucaryotes tu peux sans soucis, il suffit juste de remplacer le promoteur procaryote par un promoteur eucaryote. Le promoteur doit être spécifique de la cellule qui va l'exprimer, mais la séquence codante, elle, peut venir de n'importe où et être exprimé n'importe où (si associé au bon promoteur). La deuxième question je pense qu'elle s'est trompé à l'oral (l'après-midi du moins). En effet tu as bien compris il faut une enzyme qui coupe avant ATG et après TGA et non ATG sinon tu as coupé que ce codon tout seul. J'espère t'avoir répondu et ne pas avoir dit de bêtise Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Tacocat Posted February 10, 2020 Author Ancien Responsable Matière Share Posted February 10, 2020 Merci beaucoup @Croziflette_Claquette ! En effet c'est ce qu'il me semblait pour ma deuxième question. Je reviens juste sur ma première question, quel serait l'intérêt d'avoir un gène de résistance à un antibiotique dans une cellule eucaryote ? Est-ce parce que l'amplification et le clonage du vecteur d'expression se font en milieu bactérien comme j'ai cru le comprendre ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Croziflette_Claquette Posted February 11, 2020 Share Posted February 11, 2020 Tu verras que rajouter un gene de résistance à un antibiotique quand on fait cette technique permet de vérifier si le vecteur a bien transformé une cellule eucaryote. En effet, on les mettra ensuite dans un milieu avec l'antibiotique et les cellules eucaryotes qui ont reçu le vecteur résisteront et on saura qu'elles portent les gènes rajoutés par le vecteur. Tu comprendras par la suite. Avec plaisir ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Tacocat Posted February 12, 2020 Author Ancien Responsable Matière Share Posted February 12, 2020 Super merci pour ton aide précieuse @Croziflette_Claquette ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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