Ancien Responsable Matière lajuxtaposé Posted January 3, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted January 3, 2020 Bonsoir, Je ne comprends pas l'item A qui est compté faux : j'ai raisonné en me disant que l'on coupe le brin, on se retrouve avec un brin qui possède un T sur l'extrémité que l'on peut marquer avec du Gamma P32dTTP ? Je ne comprends pas mon erreur,... Merci et bonne soirée Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Solution Cristal-STAL Posted January 3, 2020 Ancien Responsable Matière Solution Share Posted January 3, 2020 saluuut @lajuxtaposé , alors oui je vois ton erreur, tu pensais qu'après le passage de l'endonucléase on allait avoir le T en 5' et donc comme il est en 5' il conserve ses 3 phosphates donc le gammaP32TTP ça marcherait. Alors oui et non, ta logique par rapport au Gamma et le 5' c'est parfait ! (et c'est sur cela qu'elle piège souvent car seul le nucléarise en 5' garde son phosphate Gamma) mais sauf que dans l'énoncé on te dit "on veut réaliser une sonde marqué à partir de l'ADN suivant" : donc en faite on veut garder la même séquence mais juste on va remplacer les nucléotides "normaux" par des nucléotides marqués (soit avec la radioactivité des phosphates (gamma ou alpha P32) soit avec la radioactivité de l'hydrogène (tritié)) et aussi ce qui pouvait te mettre la puce à l'oreille c'est : ADN polymérase I qui a une activité polymérase (logique) mais surtout exonucléasique !!! Donc en faite qu'est ce qui va se passer ? ton endonucléase va créer une "brèche" après le T (au niveau de la flèche dans ton énoncé) ta polymérase I va "rentrer" par la brèche et se fixer au T, puis elle va tout "détruire" grâce à son activité 5'-3' exo et elle va "reconstruire" avec son activité polymérase en prenant les nucléotides de ton milieu réactionnel qui seront radioactif bien sur pour pouvoir marquer ta sonde Donc en gros ton 5' ne va pas bouger, cela reste tjrs ACGT et ensuite tu vas continuer avec tes nouveaux nucléotides, donc ils n'auront pas les 3 phosphates donc la A est fausse J'espère j'ai été assez clair ahah, si jamais tu n'as pas compris n'hésite pas, je retenterai ma chance !! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière lajuxtaposé Posted January 4, 2020 Author Ancien Responsable Matière Share Posted January 4, 2020 Salut @Cristal-STAL ! J'ai parfaitement compris, merci à toi !!! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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