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Cc 2018


C31

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Coucou, 

 

Pour ce QCM, il faut que tu reprenne les résultats du QCM 5, en effet, tu as besoins des séquences des amorces pour répondre au QCM 6, il faut aussi savoir quelle amorce s'apparie en 5' et laquelle s'apparie en 3' ; laquelle s'apparie sur le brin sens et laquelle s'apparie sur le brin non sens...

 

Ensuite, il faut que tu regarde si tes amorces contiennent les séquences des enzymes de restriction, par exemple est-ce qu'elles peuvent être coupées par EcoR1 et XbaI (Item A, QCM 6), et sur quelle amorce se situe le site de restriction (il faut aussi que tu vérifie si les enzymes coupe bien avant l'ATG pour éviter de couper dans la séquence codante) ? Si elles peuvent être coupées, il faut ensuite que tu regarde la séquence de EcoR1 et de XbaI dans le plasmide, et leur position l'une par rapport à l'autre. EcoR1 est t'il avant ou après XbaI ? ce qui va changer ton résultat.

 

Exemple : "Item A :  Précédent le clonage dans le vecteur, la digestion du produit de PCR par EcoRI et XbaI permettra l’expression de la protéine dans les bactéries."

  • D'après les résultats du QCM 5, l'amorce 1 est située en 5' en du produit de PCR et l'amorce 2 est située en 3'.
  • On remarque que notre amorce 1 peut être coupé par EcoR1 et notre amorce 2 par XbaI. 
  • Cependant sur le plasmide, XbaI est situé avant EcoRI, car attention sur le schéma de l'énoncé le sens de réplication du plasmide est inversé par rapport au au schéma du cours.
  • Donc si l'on fait le clonage avec ces enzymes, la séquence de la follis (notre produit de PCR), sera à l'envers. Donc on n'aura pas d'expression de la follis.

    • Ainsi, l'item A est faux. 

     

     

    L'item D est faux, car si on cherche la séquence de BamHI, on remarque qu'elle n'est présente ni sur l'amorce 1, ni sur l'amorce 2 . Ainsi on ne peut pas cloner la séquence de la Follis dans notre vecteur (bien que le site reconnue par HindIII soit présent sur l'amorce 1), car notre produit de PCR ne peut pas être coupé par BamH1. Il n'y aura donc pas d'expression de la follis si on utilise cette enzyme de restriction.

     

    J'espère que j'ai été claire et que ça a pu t'aider.

Edited by LdvMstr
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