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QCM techniques Sonde/coupure hybridation


Go to solution Solved by Moumou,

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Posted

salut salut 

 

grosse incompréhension devant ce QCM:

 

1) en fait quand tu coupes dans la zone d'hybridation d'une sonde ça peut quand même le révéler ensuite ? 

 

2) quelle différence entre couper du DNA et mettre du BET et faire un Southern Blot ? 

 

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A) perso j'aurais dit une unique bande de 1kpb ? vu que le site de sonde A est coupé mais apparement c'est le cas uniquement en southern (B) du coup j'ai pas compris la diff entre South et juste du BET ... 😕

 

merci bcp

 

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  • Ancien Responsable Matière
  • Solution
Posted

Salut @SJr,

  On 12/29/2019 at 8:36 AM, SJr said:

1) en fait quand tu coupes dans la zone d'hybridation d'une sonde ça peut quand même le révéler ensuite ? 

Expand  

Oui, car la sonde peut s'hybrider avec les deux extrémités qui ont été coupées.

 

  On 12/29/2019 at 8:36 AM, SJr said:

2) quelle différence entre couper du DNA et mettre du BET et faire un Southern Blot ? 

Expand  

Quand tu as tes fragments d'ADN (double brin) et que tu y ajoute du BET tu vas avoir un signal sous UV de tous les fragments sans exception. Le BET fait ressortir tout l'ADN de manière aspécifique. Il peut aussi fonctionner sur l'ARN en se plaçant au niveau des zones complémentaires (qui se sont hybridées entre elles) mais ça le professeur ne le précise pas, c'est juste pour expliquer comment fonctionne le BET.

 

La sonde (d'un Southern) elle, s'hybride avec des zones particulières de l'ADN (simple brin), donc en fonction de la zones de clivage par les enzymes et de la zones d'hybridation de la sonde, certains fragments génèreront un signal et d'autres non. C'est un marquage beaucoup plus spécifique que le BET.

 

  On 12/29/2019 at 8:36 AM, SJr said:

A) perso j'aurais dit une unique bande de 1kpb ? vu que le site de sonde A est coupé mais apparement c'est le cas uniquement en southern (B) du coup j'ai pas compris la diff entre South et juste du BET ... 😕

Expand  

Vu que le BET va mettre en évidence TOUS les fragments, on aura bien une bande de 0,5 kb et une de 1kpb.

 

451190353_Capturedcran2019-12-2909_48_18.thumb.png.f920fb8c99539ccfec62baa481833c9a.png

Désolée pour le dessin débile, je pense que t'avais compris mais c'est au cas où.

Posted (edited)

nope tkt déja, merci de ta réponse 

 

  On 12/29/2019 at 8:50 AM, Moumou said:

Quand tu as tes fragments d'ADN (double brin) et que tu y ajoute du BET tu vas avoir un signal sous UV de tous les fragments sans exception. Le BET fait ressortir tout l'ADN de manière aspécifique. Il peut aussi fonctionner sur l'ARN en se plaçant au niveau des zones complémentaires (qui se sont hybridées entre elles) mais ça le professeur ne le précise pas, c'est juste pour expliquer comment fonctionne le BET.

Expand  

ok dac c'est bien ce que j'imaginais le BET c'est "l'actinomycine de la réplication" eh oué c'est vrai qu'on pourrait le mettre sur de la tige boucle de RNA, pas maaall ce truc !! 

 

ah bah oui le BET il va partout du coup où y'a du double brin donc okay je comprends mieux 

 

 

merci merci 

EDIT:

 

 

pourquoi la B est fausse alors ?  

 

- si je coupe via EcoR1 et BamHI, elle peut par la suite reconnaître un 0.5 et un 1 normalement, avec superposition de la B donc une bande dense en 1kpb et une bande plus claire en 0.5 ?  

 

EDIT 2 pas la bonne sonde, ça c'est l'item E bref...

 

(merci)

 

wTXM06M.png 

Edited by SJr

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