Ancien Responsable Matière choLOLApine Posted December 28, 2019 Ancien Responsable Matière Share Posted December 28, 2019 Bonsoir! J'ai pas mal de difficultés à comprendre les qcm en règle général sur le séquencage avec la méthode de Sanger. Une ame charitable pourrait-elle m'expliquer le principe général du séquencage, et comment interpréter les résultats qu'on nous présente en qcm? ce qcm si c'est plus facile avec un exemple peut-etre Merci d'avance! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Luciolette Posted December 28, 2019 Solution Share Posted December 28, 2019 Bonsoiiir ! @lola_svry Le séquençage de Sanger est une technique qui utilise des desoxyribonucléotides et des didéxoxyribonucléotides en quantité beaucoup moins importante qui vont s'insérer de façon aléatoires. Les didésoxyribonucléotides terminent l'élongation car ils ne permettent plus de faire une nouvelle liaison phosphodiester. Donc on prend un brin matrice, une sonde et ce mélange de nucléotides. Ainsi aléatoirement au cours des cycles on va obtenir des fragments de toutes les tailles qui sont complémentaires du brin matrice. On fait migrer l'ensemble de ces fragments sur un gel d'électrophorèse à très haute définition qui est capable de différencier des poids moléculaire à un nucléotide près. Ainsi plus le fragment migre loin plus il est petit . Or on est capable par différent marquage comme les fluorochromes de déterminer le dernier nucléotide qui est un désoxyribonucléotide. Donc en lisant le gel de bas en haut on lit des fragments qui changent d'un nucléotide donc on obtient notre séqence en 5'-3' du brin complémentaire au brin séquencé. Maintenant si l'on regarde le QCM : -A : VRAI Pour le témoin : On commence par déterminer la séquence du brin complémentaire dans le sens 5'-3' en lisant le gel de bas en haut, ici on a : 5' ATCCCGGGCA 3'. On sait que les brins d'ADN sont complémentaires et anti-parallèles on obtient ainsi le brin matrice : 5' TGCCCGGGAT 3' (toujours bien faire attention à l'orientation des brins. ). Pour le patient : on fait la même technique donc le brin complémentaire : 5' ATCCCGGTCA 3' et le brin matrice 5' TGACCGGGAT 3' Ainsi on remarque qu'il y a bien une mutation C->A pour le troisième nucléotide du brin matrice. B : FAUX Ici il faut bien faire attention à l'orientation des brins, nous on a la séquence 5' CCCGGG 3' donc cela ne correspond pas à la séquence palindromique reconnue par ces deux enzymes de restrictions. C : FAUX Cet item est aussi faut car la mutation ne crée ou ne détruit aucun site de restriction puisque on a pas la bonne orientation. D : FAUX Elle n'abolit pas l'action de l'enzyme car même chez le témoin cette enzyme ne peut pas agir. E : VRAI Cela correspond au principe même de la méthode. Voila donc bon courage pour lire mon explication un peu longue et n’hésite pas si tu as des questions ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière choLOLApine Posted December 28, 2019 Author Ancien Responsable Matière Share Posted December 28, 2019 Génial merci beaucoup tout est beaucoup plus clair! (j'avais absolument tout compris à l'envers aha) Je vais essayer de m’entraîner sur d'autres qcm et je reviendrais si j'ai encore des difficultés Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Luciolette Posted December 28, 2019 Share Posted December 28, 2019 @lola_svry Super alors ! Bon courage pour la suite ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
carolineb Posted December 31, 2019 Share Posted December 31, 2019 Bonjour @Luciolette! je ne comprends pas trop pourquoi la B est fausse car comme tu as dit on a la séquence 5' CCCGGG 3' du coup je ne vois pas pourquoi ces enzymes ne pourraient pas couper.. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Luciolette Posted December 31, 2019 Share Posted December 31, 2019 @carolinebnrd salut ! Alors on a bien la séquence 5’ CCCGGG 3’ alors que les enzymes de restriction reconnaissent la séquence 5’ GGGCCC 3’, du coup tu vois c’est l’orientation opposée à ce que l’on a donc ça peut pas couper. Il faut vraiment que les lettres et l’orientation soient identiques pour que ça coupe. J’espère avoir pu t’aider ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
carolineb Posted December 31, 2019 Share Posted December 31, 2019 @Luciolette ah oui d'accord merci!! et dans le cas où on ne nous donne pas l'orientation 5' 3' c'est que la séquence peut être coupée dans les 2 sens? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Luciolette Posted December 31, 2019 Share Posted December 31, 2019 @carolinebnrd non les sequences sont toujours orientés (et en général en 5’-3’). D'ailleurs faut toujours faire très attention à cette orientation en génome ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
carolineb Posted December 31, 2019 Share Posted December 31, 2019 @Luciolette mais par exemple dans le qcm23 du TD5 il est juste dit "les enzymes HpaII et Msp I reconnaissent le même site de restriction CCGG et coupent au même endroit C/CGG" dans ce cas ça peut couper dans les 2 sens ou même si l'orientation n'est pas précisée on en déduit que c'est que en 5'-3'? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Luciolette Posted December 31, 2019 Share Posted December 31, 2019 @carolinebnrd pour les enzymes de restriction si le sens n’est pas précisé c’est que c’est 5´-3´ Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
carolineb Posted December 31, 2019 Share Posted December 31, 2019 @Luciolette ok merci bcp! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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