Eleonore33 Posted December 27, 2019 Share Posted December 27, 2019 Bonjour, quelqu'un peut m'expliquer comment on procède pour ce genre de QCM svp ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Mathou09 Posted December 28, 2019 Share Posted December 28, 2019 Salut ! Pour ce genre de qcm je pense que t'as pas vraiment le choix, il te faut prendre chaque item au cas par cas et tout vérifier. Je vais tenter de t'expliquer en faisant celui là. A- Si tu digères le plasmide par EcoR1 et que tu ne fais aucune modification sur l'ARNc tu auras toutes tes extrémités compatibles (vu que l'ADNc finit par 2 sites EcoR1). Donc ton ADNc a une chance sur 2 d'être dans le bon sens (et une sur deux d'être dans le mauvais sens), donc ici la probabilité théorique d'avoir la protéine recombinante n'est pas de 100%. B,C,D- Perso, je commence petit à petit à vérifier : je commence par le plasmide et je regarde si les deux endonucleases utilisées sont compatibles ou non : dans cet exo ça ne sert pas vraiment vu qu'on te dit qu'on fera une dephosphorylation, mais si elle n'est pas faite ton plasmide risque de se refermer sans la séquence voulue. Ensuite je regarde l'ADNc pour voir la carte de restriction : pour ces 3 items, on voit qu'en utilisant Spe1 ou Sac1 ça va compromettre la séquence codante et on aura donc pas notre protéine recombinante entière. E- Donc pareil pour le plasmide, pour l'ADNc on voit qu'ici les enzymes respectent la séquence donc on continue à vérifier. Déjà il faut vérifier le sens par rapport au plasmide : par exemple ici c'est le bon sens car tu digères ton plasmide par Spe1 qui est compatibles avec Xba1 et EcoR1 compatible avec l'extrémité de ton ADNc. De plus tu vérifies que EcoR1 n'est pas compatible avec Xba1. Comme tu as Spe1 en premier dans ton plasmide et Xba1 en premier sur ton ADNc tu auras forcément le bon sens (car dans l'autre sens les extrémités ne seraient pas compatibles donc pas possible). Donc sur celui là tu as tout qui est bon : intégrité de la séquence codante, orientation,.. Voilà j'espère que c'est déjà un peu plus clair, mon explication est pas forcément très organisée (oups) donc si t'as besoin de plus d'explications n'hésite pas ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Eleonore33 Posted December 28, 2019 Author Share Posted December 28, 2019 Il y a 7 heures, Mathou09 a dit : Salut ! Pour ce genre de qcm je pense que t'as pas vraiment le choix, il te faut prendre chaque item au cas par cas et tout vérifier. Je vais tenter de t'expliquer en faisant celui là. A- Si tu digères le plasmide par EcoR1 et que tu ne fais aucune modification sur l'ARNc tu auras toutes tes extrémités compatibles (vu que l'ADNc finit par 2 sites EcoR1). Donc ton ADNc a une chance sur 2 d'être dans le bon sens (et une sur deux d'être dans le mauvais sens), donc ici la probabilité théorique d'avoir la protéine recombinante n'est pas de 100%. B,C,D- Perso, je commence petit à petit à vérifier : je commence par le plasmide et je regarde si les deux endonucleases utilisées sont compatibles ou non : dans cet exo ça ne sert pas vraiment vu qu'on te dit qu'on fera une dephosphorylation, mais si elle n'est pas faite ton plasmide risque de se refermer sans la séquence voulue. Ensuite je regarde l'ADNc pour voir la carte de restriction : pour ces 3 items, on voit qu'en utilisant Spe1 ou Sac1 ça va compromettre la séquence codante et on aura donc pas notre protéine recombinante entière. E- Donc pareil pour le plasmide, pour l'ADNc on voit qu'ici les enzymes respectent la séquence donc on continue à vérifier. Déjà il faut vérifier le sens par rapport au plasmide : par exemple ici c'est le bon sens car tu digères ton plasmide par Spe1 qui est compatibles avec Xba1 et EcoR1 compatible avec l'extrémité de ton ADNc. De plus tu vérifies que EcoR1 n'est pas compatible avec Xba1. Comme tu as Spe1 en premier dans ton plasmide et Xba1 en premier sur ton ADNc tu auras forcément le bon sens (car dans l'autre sens les extrémités ne seraient pas compatibles donc pas possible). Donc sur celui là tu as tout qui est bon : intégrité de la séquence codante, orientation,.. Voilà j'espère que c'est déjà un peu plus clair, mon explication est pas forcément très organisée (oups) donc si t'as besoin de plus d'explications n'hésite pas ! ok merci beaucoup !! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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