Puce adn

[Guest Puce]

Bonjour je ne comprend pas très bien le principe des puces à adn … pourrait on m’expliquer ? 

Mercii

[Ga31]

Bonjour,

 

Principe des puces à ADN :

 

Plusieurs centaines de milliers de sondes (oligonucléotides complémentaires et anti parallèle de gènes ou de séquences chromosomiques) correspondant à une partie du génome sont réparties à un endroit particulier sur une plaque. 

On va mettre en contact tout le génome d’un individu « coupé en morceaux » et marqué par des fluorophores avec les sondes de la plaque. Chaque séquence va donc s’hybrider avec la sonde complémentaire. 

Ainsi les sondes vont être recouvertes du génome de l’individu. Si il y a des délétions, certaines sondes ne seront pas recouvertes et si il y a des duplications alors certaines sondes seront recouvertes par beaucoup plus d’ADN.

On réalise une expérience contrôle en parallèle, c'est à dire que l'on hybride une puce identique avec l’ADN d’une personne n’ayant aucune pathologie. On compare la puce du patient analysé avec celle d’un individu sain.

 

On peut aussi n’utiliser qu’une seule puce sur laquelle on hybride en même temps l’ADN du patient marqué avec un fluorophore rouge et l’ADN contrôle marqué avec un fluorophore vert par exemple. 

Si le ratio (fluorescence rouge /fluorescence verte) = 1 alors il y a autant d’ADN dans les cellules de départ du patient et que dans les cellules contrôles. Le puits contenant la même quantité de fluorescence rouge et verte apparaîtra jaune.

Si chez le patient malade une partie du génome ne peut pas s’hybrider avec la sonde, alors ce puits apparaîtra de couleur verte car seul l’ADN contrôle se sera hybridé.

 

L’analyse est qualitative car elle permet de détecter si il y a hybridation ou non des séquences complémentaires avec celles disposées sur la puce. Elle est aussi quantitative car elle permet de détecter la quantité de signal obtenu. 

 

Voilà j'espère que c'est plus clair pour toi