digestion produit de PCR

[Jeggys]

Bonjour, 

J'ai un doute pour les digestions du produit par PCR, ici pour les item C,D et E 

Comment fait on pour trouver le nombre de fragments? 

Le séquence de restriction de MaeIII étant dans le brin je comprend le premier fragment mais pour le deuxième est ce que c'est celui dans le sens inverse? (3'->5')

Etant donné que MaeIII c'est 5'->3' je ne sais pas si on peut aller dans le sens 3'->5'....

Je sais pas si c'est clair donc voila le qcm !

Merci d'avance

[Amonbofis]

salut @Jeggys Les enzymes de restriction coupent le double brin, vu que les sequences sont palindromiques tu n'as pas besoin de vérifier si le deuxième brin est aussi coupé, c'est le principe même des enzymes.

Pour ce qcm, tu vois que tu as une seq normale présentant 1 site de restriction donc quand l'enzyme coupe, elle sépare le fragment de 200pb en 2 fragments plus petits.

Le patient présente 2 fois le site de restriction donc quand on coupe à 2 endroits un fragment, on en obtient bien 3 plus petits.

Le "au moins" est indiqué car on ne te dit pas que la sequence ne contient pas d'autre sites de restriction qui ne seraient pas représentés !

Du coup réponse vrai C et E

[Jeggys]

D'accord merci ! c'est plus clair 

J'en profite par rapport à l'ADNc comment on fait?

[Moumou]

Il y a 18 heures, Jeggys a dit :

 

J'en profite par rapport à l'ADNc comment on fait?

Si tu as un ADNc simple brin, l'enzyme ne pourra pas couper car c'est un acide nucléique simple brin (et qu'elle ne coupe de que le double brin). 

Si ton ADNc est double brin alors l'enzyme coupera là où il y a sa séquence palindromique (à condition que la séquence soit dans un exon).

[Jeggys]

Merci!