vecteurs et transgenese de recombinaison

[Wonder]

Bonjouuuur, voila mes petites questions : 

- Un Vecteur est il nécessairement une molécule d'ADN ou peut-il être une molécule d'ARN ? 

- de plus je ne pense par avoir compris la diapo "microinjection des blastocytes et réimplantation" , pourquoi on espère avoir des souris marrons, mais on croise les chimères avec des noires ?

- pour le système CRISPR-Cas9, l'ARN auquel est lié Cas9 le guide vers l'endroit qu'il faut éliminer ? 

après je voulais vérifier si j'avais bien compris la finalité des deux systèmes : on fait une coupure avec un des deux systèmes (ZFN ou Cas9) puis soit on ajoute une séquence homologue et à ce moment là on corrige le gène muté, soit on n'ajoute rien et alors on invalide ce gène ? 

 

merci par avance !!

[Kovu]

moi non plus j’ai rien compris à cette diapo de micro injection! et pareil, cette phrase est trop bizarre!

[ClaraF]

Bonsoir!!

 

Du coup:

 

- Un vecteur c'est ou bien de l'ADN ou de l'ARN. 

 

- Pour l’expérience de la micro-injection, ça va être un peu plus long: 

 

Alors déjà c'est important de savoir que le pelage marron est dominant sur le pelage noir. 

1. Donc là on va mettre des cell de souris marron et on les mélange dans le blastocyste de souris noir. 

2. Du coup la maman aura ou bien des bébés tous noirs  apparentment) + bébés mosaïques (ou chimeres) et donc avec l’allèle marron intégré dans leur ADN, mais pas par tout, c'est pour ça qu'elles ont les deux couleurs. Le problème là c'est qu'on ne sait pas si l’allèle du pelage marron est aussi présent dans les cellules germinales des bébés mosaïques (les ovaires et les spermatozoides), et donc si ce n'est pas le cas, ça ne sert a rien de les garder, car elles ne vont pas transmettre le pelage marron a leur propres bébés. 

3. C'est pour ça qu'on prend les chimères plus plus marrons possibles (les probabilités serons plus hautes), et on les croise avec des souris noirs. Si leur cellules germinales sont atteintes de la modification d'ADN, alors les nouveaux bébés auront un allele marron (provenant des chimeres) et un allele noir (provenant du papa noir), et du coup ils seront marrons, car c'est un allele dominant (hétérozygotes a pelage marron = AGOUTI). Mais par contre, si notre chimere n'as pas eu la modification de l'allele dans son adn des cell germinales, ses bébés seront tous noirs. 

4. Là pour finir, on veut juste que nos souris aie les deux alleles mutés marrons, c'est pour ça qu'on croise deux Agoutis (hétérozygotes), et on va garder les bébés qui auront (en fin) les deux alleles marrons (homozygotes).

Et puis voilà!

 

-Après, pour le CRISPR-Cas9, oui, c'est l'ARN qui cible al séquence d'ADN a couper. 

Et le reste, oui t'as bien compris  

 

C'est un peu long et embrouillant, mais si ce n'est pas assez clair, dites-le moi et je vais essayer de re-expliquer!  COURAGE!

[Wonder]

Le 19/12/2019 à 23:27, ClaraF a dit :

Bonsoir!!

 

Du coup:

 

- Un vecteur c'est ou bien de l'ADN ou de l'ARN. 

 

- Pour l’expérience de la micro-injection, ça va être un peu plus long: 

 

Alors déjà c'est important de savoir que le pelage marron est dominant sur le pelage noir. 

1. Donc là on va mettre des cell de souris marron et on les mélange dans le blastocyste de souris noir. 

2. Du coup la maman aura ou bien des bébés tous noirs  apparentment) + bébés mosaïques (ou chimeres) et donc avec l’allèle marron intégré dans leur ADN, mais pas par tout, c'est pour ça qu'elles ont les deux couleurs. Le problème là c'est qu'on ne sait pas si l’allèle du pelage marron est aussi présent dans les cellules germinales des bébés mosaïques (les ovaires et les spermatozoides), et donc si ce n'est pas le cas, ça ne sert a rien de les garder, car elles ne vont pas transmettre le pelage marron a leur propres bébés. 

3. C'est pour ça qu'on prend les chimères plus plus marrons possibles (les probabilités serons plus hautes), et on les croise avec des souris noirs. Si leur cellules germinales sont atteintes de la modification d'ADN, alors les nouveaux bébés auront un allele marron (provenant des chimeres) et un allele noir (provenant du papa noir), et du coup ils seront marrons, car c'est un allele dominant (hétérozygotes a pelage marron = AGOUTI). Mais par contre, si notre chimere n'as pas eu la modification de l'allele dans son adn des cell germinales, ses bébés seront tous noirs. 

4. Là pour finir, on veut juste que nos souris aie les deux alleles mutés marrons, c'est pour ça qu'on croise deux Agoutis (hétérozygotes), et on va garder les bébés qui auront (en fin) les deux alleles marrons (homozygotes).

Et puis voilà!

 

-Après, pour le CRISPR-Cas9, oui, c'est l'ARN qui cible al séquence d'ADN a couper. 

Et le reste, oui t'as bien compris  

 

C'est un peu long et embrouillant, mais si ce n'est pas assez clair, dites-le moi et je vais essayer de re-expliquer!  COURAGE!

merci bcp !!