Guest pleasehelp Posted December 5, 2019 Share Posted December 5, 2019 Bonjour, je n'arrive pas a comprendre pourquoi les 2 oligodésoxynucleotides utilisés pour l'amplification de l'exonèrent II doivent avoir les séquence TGGCCGCCGC et TTGTCCAGTT voici la sequence : https://zupimages.net/viewer.php?id=19/49/y1ee.png si quelqu'un pouvait m'aider je suis complètement bloqué, merci par avance !! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution anthonytro Posted December 5, 2019 Solution Share Posted December 5, 2019 Salut ! Alors pour commencer, tu vas choisir des amorces qui vont correspondre aux extrémités de ton brin. Le truc c'est qu'elles doivent encadrer ton exon. Je te rappelle aussi que l'élongation de l'ADN va toujours du 5' vers le 3'. La plus simple à trouver est l'amorce qui s'hybride en 3' de ton exon. Elle va pouvoir directement s'hybride au brin sens. Ici en 3' tes 10 derniers nucléotides sont 5' AACTGGACAA 3'. Donc ton amorce va va être de 3' vers 5' TTGACCTGTT, ce qui fait de 5' vers 3' : TTGTCCAGTT. Maintenant pour l'amorce qui va s'hybrider en 5', le problème c'est que si elle s'insère directement sur le brin sens, la synthèse d'ADN va se faire dans le mauvais sens, c'est-à-dire en fuyant l'exon. Tu vas donc prendre une amorce qui va s'hybrider au brin complémentaire. Le brin complémentaire de 10 premiers nucléotides nous donne 5' GCGGCGGCCA 3'. Donc l'amorce qui va venir s'hybrider à ce brin complémentaire ne sera autre que 5' TGGCCGCCGC 3'. Si tu ne comprend pas tout de suite c'est normal. D'abord parce qu'il faut y passer du temps, et ensuite parce que ma réponse n'est qu'un résumé d'une réponse beaucoup plus complète que je t'invite à allez regarder. N'hésites pas si tu as des questions ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Guest please help Posted December 6, 2019 Share Posted December 6, 2019 Il y a 23 heures, anthonytro a dit : Salut ! Alors pour commencer, tu vas choisir des amorces qui vont correspondre aux extrémités de ton brin. Le truc c'est qu'elles doivent encadrer ton exon. Je te rappelle aussi que l'élongation de l'ADN va toujours du 5' vers le 3'. La plus simple à trouver est l'amorce qui s'hybride en 3' de ton exon. Elle va pouvoir directement s'hybride au brin sens. Ici en 3' tes 10 derniers nucléotides sont 5' AACTGGACAA 3'. Donc ton amorce va va être de 3' vers 5' TTGACCTGTT, ce qui fait de 5' vers 3' : TTGTCCAGTT. Maintenant pour l'amorce qui va s'hybrider en 5', le problème c'est que si elle s'insère directement sur le brin sens, la synthèse d'ADN va se faire dans le mauvais sens, c'est-à-dire en fuyant l'exon. Tu vas donc prendre une amorce qui va s'hybrider au brin complémentaire. Le brin complémentaire de 10 premiers nucléotides nous donne 5' GCGGCGGCCA 3'. Donc l'amorce qui va venir s'hybrider à ce brin complémentaire ne sera autre que 5' TGGCCGCCGC 3'. Si tu ne comprend pas tout de suite c'est normal. D'abord parce qu'il faut y passer du temps, et ensuite parce que ma réponse n'est qu'un résumé d'une réponse beaucoup plus complète que je t'invite à allez regarder. N'hésites pas si tu as des questions ! au final, je trouve ta réponse peut être plus clair, merci à toi pour être sur de bien avoir compris en gros on cherche les brins complémentaires et on les réoriente dans le bon sens ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Guest pleasehelp Posted December 6, 2019 Share Posted December 6, 2019 il y a 2 minutes, Invité please help a dit : au final, je trouve ta réponse peut être plus clair, merci à toi pour être sur de bien avoir compris en gros on cherche les brins complémentaires et on les réoriente dans le bon sens ? Du coup l'extrémité 5' l'amorce correspond directement à la séquence codante au final, peut on le déduire directement en admettant donc que l'amorce correspond au 10 premiers nucleotides codants ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
anthonytro Posted December 6, 2019 Share Posted December 6, 2019 Oui biensur tu fais comme ça ! Je te l'ai simplement détaillé pour que tu comprennes pourquoi tu fais ça ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Guest pleasehelp Posted December 7, 2019 Share Posted December 7, 2019 Il y a 20 heures, anthonytro a dit : Oui biensur tu fais comme ça ! Je te l'ai simplement détaillé pour que tu comprennes pourquoi tu fais ça ! merci x 1000 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Recommended Posts
Join the conversation
You can post now and register later. If you have an account, sign in now to post with your account.
Note: Your post will require moderator approval before it will be visible.