tech génome

[DrR]

salut

dans la nick translation, on marque la sonde après l'avoir synthétisée ? ou c'est après la dénaturation des 2 brins (le marqué et le non marqué) qu'on prend le brin marqué et qu'on utilise comme sonde ?

est ce que la nucélase S1 coupe le cdna ou seulement arn et adn génomique ?

pourquoi dans la phase d'élongation de la PCR on travaille à haute température ? normalement la haute température j'ai compris que ça dénaturait les brins donc vu qu'on veux hybrider pourquoi on chauffe ?

tjs e nPCR je comprends pas pourquoi on a des extrémités fixes et d'autres variables

merci

Edited November 25, 2019 by DrR

[Moumou]

Salut @DrR, alors voilà ce que j'ai noté dans mon cours :

 

Translation de coupure :

Coupure de l’ADN qui se déplace dans le sens 5’ 3’

Avant d’intégrer le nucléotide marqué, on doit couper l’ADN (formation d’un trou pour qu’un nt s’incorpore)

 

Utilisation de 2 enzymes :

• • La DNAse I à faible concentration pour couper un seul brin
  • Une polymérase (synthèse de nt)

Étapes :

• • Coupure du brin par la DNAse (on dégage le premier nt)
  • Utilisation de la DNA Pol I
  • Ajout d’un mélange de dNTP contenant 1 nt qui sera marqué (ici le dATP)
  • La DNA Pol va incorporer des nt là où on a fait des trous mais elle va aussi grignoter le brin dans lequel s’incorpore les nt
  • Intégration des dATP radioactifs au fur et à mesure que la DNApol avance

 

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