Guest Zaoui Posted November 11, 2019 Share Posted November 11, 2019 Bonjour ! Je ne comprends pas très bien les items de ce qcm... Un petit coup de main svp? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Solution juliewsr Posted November 11, 2019 Ancien Responsable Matière Solution Share Posted November 11, 2019 (edited) Bonjour ! - Tout d'abord, il faut comprendre le schéma. il s'agit du résultat d'une méthode de Sanger, après electrophorese de fragments fluorescents. Successivement, des ddNTP fluorescents se sont incorporés et ont générés de petits fragments de séquences (car on ne peut pas continuer la synthèse après un ddNTP). La présence de dNTP en excès leur permet de s'intégrer majoritairement et d'allonger certaines séquences plus que d'autres. A la fin, tu te retrouves ainsi avec plein pleins de séquences, copiés sur le meme brin, donc identiques, mais de tailles différentes (car se terminants à différents niveaux). - A l'electrophorese, les petits fragments vont se ranger par taille. Sachant que chaque fragment se termine par un ddNTP fluorescent (de couleur différente pour chaque base A, T, G, C), tu pourras recontituer l'ordre des bases, en partant de la dernière base du plus petit fragment, jusqu'à la dernière base du plus grand fragment. - Tu remarques ainsi d'au niveau de la 200ème base, c'est parfois un A et parfois un T ! Cela signifie qu'il y a une mutation sur certains brins. Alors voyons ces items : Item A : on te demande si dans la technique de séquence de l'ADN par méthode de Sanger, tu as besoin de désoxynucléotides (dTTP, dATP, ...) ET de didésoxynucléotides (ddTTP, ddATP, ...) → en effet, dans la méthode de Sanger, tu as besoin des 2 types de nucléotides : les dNTP et les ddNTP (ce qui n'est pas le cas de la méthode de pyroséquencage). Item B : est ce que les brin de cette séquence pourront être coupés par ECO RI ? → pour cela tu regardes si le site de restriction d'ECO RI est présent. C'est le cas mais seulement le brin avec un A en 200eme base ! Comme tu le vois sur le schéma, il y a une mutation et l'Adénine est remplacé par une thymine sur un des brins. Dans le cas, ECO RI ne reconnaitra pas le site et ne pourra pas couper. Item C : même question que l'item B, avec le site de restriction de BamHI cette fois. → dans ce cas, il ne semble pas y avoir de mutation au niveau de son site de restriction. Tous les brins pourrons être coupé par Bam H1. Item D : le patient peut il être hétérozygote ? Cad avoir la mutation sur un brin et pas sur l'autre ? → oui c'est possible, c'est ce que te révèle le schéma : il y a les 2 possibilités. Item E : quel serait le résultat d'un southern blot (dont la sonde ne s'hybride pas au niveau de la mutation) après avoir ajouté ECO RI ? → Tu aurais non pas 2 mais 3 bandes ! Pourquoi ? - 2 bandes pour le brin non muté, qui aura été clivé par ECO RI. Le site ECO RI se trouve au niveau de la 200ème base, ce donne après clivage : 1 bande de 200pb et une bande de 100pb. - 1 seule bande pour le brin muté, qui ne comporte pas le site ECO RI, donc qui n'aura pas été clivé (300pb). Voila, j'espère que ca répond à tes questions ! Edited November 11, 2019 by juliewsr Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Guest Zaoui Posted November 11, 2019 Share Posted November 11, 2019 Je viens de refaire le QCM avec tes explications, et je comprends beaucoup mieux!! Merci beaucoup beaucoupp! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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