syncytio13 Posted November 6, 2019 Share Posted November 6, 2019 Salut ! J'ai un petit soucis avec ce QCM, je pensais avoir compris comment insérer un ADNc dans un plasmide mais apparemment non items vrais BE J'aimerais bien une correction des items B/C/D/E parce que je trouve celle de la colle pas très claire (surtout parce que j'ai pas compris) - Alors on est d'accord que pour insérer la "Boostine" il faut un site de restriction avant le codon AUG ? - Ce site de restriction doit être compatible avec le site de restriction du plasmide ? Parce que l'item B est juste mais Cla 1 et Xho 1 ne sont pas compatibles… pareil pour l'item E - pour l'item C, je vois pas pourquoi c'est faux. La correction c'est : extrémités non cohésives donc besoin d'une phosphatase alcaline". Mais dans tous les cas, quand on coupe un plasmide (que les extrémités générées soient à bouts francs ou à bout cohésifs) on doit utiliser une phosphatase alcaline. Donc si on prend ça en considération, aucun des items n'est vrai ??? Merci !! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Solution jpmeao Posted November 6, 2019 Ancien Responsable Matière Solution Share Posted November 6, 2019 (edited) coucouuu! pour ce genre d'exercice, il faut que tu regardes où coupent tes endonucléases, il faut que l'ordre de coupure soit le même dans ton plasmide et dans ta séquence que tu veux insérer. Deuxièmement, il faut que tes coupures se fasse après les codons AUG et STOP. item B : ici, Cla I coupe dans les séquences rouge et Xho I, dans les séquences vertes, tu vois bien que l'ordre est respecté, de plus il faut faire attention que tes enzymes de restriction ne soient pas compatibles entre elles, sinon il y a un risque de 1/2 que ton fragment se positionne à l'envers, puisqu'il peut se mettre dans les deux sens. item C : je suis d'accord avec toi, retiens que la PA est là pour que la séquence s'intègre dans ton plasmide du coup, tu te retrouves avec deux liaisons phosphate sur 4 nécessaires. Les deux autres seront créées par la bactérie dans laquelle on intègre le plasmide. Edited November 6, 2019 by jpmeao Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
syncytio13 Posted November 6, 2019 Author Share Posted November 6, 2019 @jpmeao Merci bcp ! J'avais pas compris qu'on coupait le gène et le plasmide avec les deux endonucléases ! il y a 18 minutes, jpmeao a dit : il faut que tes coupures se fasse après les codons AUG et STOP. Euh, si on veut la protéine en entier, il faut pas que la première coupure se fasse avant AUG ?? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière jpmeao Posted November 6, 2019 Ancien Responsable Matière Share Posted November 6, 2019 il y a 4 minutes, syncytio13 a dit : première coupure se fasse avant AUG sisi, mes excuses! tu va pourvoir t'entrainer et comprendre ce genre de QCMs, y'en a pas mal dans les annales, c'est tout le temps la même méthode une fois que tu as compris c'est dans la poche! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
syncytio13 Posted November 6, 2019 Author Share Posted November 6, 2019 Super merci ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Glouglou Posted November 6, 2019 Share Posted November 6, 2019 (edited) @jpmeao en fait ce n'est pas obligé que les séquences soient compatibles entre elles (pour BCE) ? j'avais mal lu les msg. du coup quel cas il faut des séquences compatibles? ^^ Edited November 6, 2019 by Nonooo Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière jpmeao Posted November 6, 2019 Ancien Responsable Matière Share Posted November 6, 2019 lorsque tes extrémités sont à bout franc, elles sont toujours compatibles, pas besoin d'avoir les mêmes bases coupées par les endonucléases. par contre lorsqu'elles sont à bout sortant, il faut vérifier, ce sujet explique : n'hésite pas si tu as d'autres questions Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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