PAG Posted November 4, 2019 Share Posted November 4, 2019 Bonsoir, J'aurais 2 petites questions par rapport au cours de cet après-midi. J'ai noté que pour déterminer l'ordre des nucléotides, il fallait tout d'abord mettre dans un seul et même tube l'ADN à analyser, une amorce, l'ADN polymérase, du dXTP et du ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP ainsi que des sels et de l'eau. Premièrement, on est bien d'accord que l'ADN polymérase ajoutée n'est pas forcément du taq polymérase (comme utilisée en PCR) car cette dernière est seulement utilisée pour ses propriétés thermiques permettant de créer de l'ADN à 72 degrés évitant que l'ADN double brin ne se reforme ? Et dans un deuxième temps, dans les polys du TAT de l'an dernier, il est marqué que le séquençage doit se faire dans 4 tubes différents avec les 4 ddXTP séparés. Alors est-ce que ça a changé entre temps car j'ai l'impression que Madame Couderc a bien précisé que le processus se faisait dans un seul tube avec des couleurs différentes selon les nucléotides synthétiques ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Guest Juju230632 Posted November 5, 2019 Solution Share Posted November 5, 2019 Bonjour, La TAQ polymérase est utilisée notamment pour ses propriétés thermiques lors d'une PCR cependant lors d'un séquençage selon Sanger c'est une autre ADN polymérase qui va allonger l'amorce (Le Pr Couderc n'a pas précisé son nom et son type). Cependant, celle-ci sera maintenue par des ADN polymérases thermostables (stables à haute température) mais ce n'est pas à retenir. Le séquençage selon Sanger il y a 30 ans se faisait avec 4 tubes et 1 ddNTP différent dans chaque tube et après on réalisait une electrophorese pour distinguer les différentes tailles d’acides nucléiques obtenus tandis que le séquençage selon Sanger de nos jours de fait avec 1 seul tube et avec des couleurs différentes ajoutés au ddXTP (fluorescence) pour distinguer ensuite quels ddXTP c’est fixe en dernier (on réalise tjrs une elctrophorese mais du coup pas besoin de 4 tubes Bonne journée Julie Tutrice Génome Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
PAG Posted November 5, 2019 Author Share Posted November 5, 2019 D'accord merci, c'était exactement ce que je voulais savoir. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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