Rangueil 2015 - QCM 3, 4, 5, 7, 12, 13 (rien que ça)

[Emma-8827]

Bonjour !

 

J’ai plusieurs questions sur l’annale R2015 :

QCM3C : il me semblait qu’en dot blot comme en immunotransfert et en immunoprécipitation, il fallait soit utiliser un anticorps spécifique pour identifier un antigène « inconnu » d’un extrait protéique, soit utiliser un antigène connu pour détecter un anticorps « inconnu ». Mais ici on cherche à détecter un anticorps inconnus avec des antigènes qui sont aussi inconnus… Comment c’est possible ? Comment est-ce qu’on va obtenir un produit coloré à la fin par exemple ?

QCM4D : si l’épitope reconnu par AC1 est absent de la P-mat, pourquoi est-ce qu’en immunotransfert AC1 reconnaît P avant et après traitement par la furine ?

QCM5E : est-ce qu’en cell Elisa ça aurait marché ?

QCM7B : avec CDC2 humaine à 25°C on a une répartition « normale » des cellules dans les différentes phases. Est-ce que le 7B est faux parce qu’il n’y a pas besoin de complémentation de la souche mutante à 25°C ? (Contrairement à 36°C)

QCM12D : la tyrosine n’est pas un acide aminé essentiel et ici il n’y a pas de problème de phénylalanine... donc je ne comprends pas pourquoi l'item est faux (même si bon exclusif faut toujours se méfier)

QCM13E : pourquoi C-terminale forcément… ?

 

Merci d'avance

PS: je mets le lien vers l'annale mais je n'ai pas réussi à mettre les photos individuelles des QCM haha

https://tutoweb.org/tat_librairie/Rangueil/Annales de Concours/2014-2015/S2/UE8 - Recherche - Rangueil - 2015..pdf

[léléGT]

Hello @Emma-8827 ! 

 

3C : ici l'antigène est connu puisqu'on sait qu'il se trouve sur l'épiderme, on cherche à savoir si on trouve les auto-Ac dans le sérum du patient

4D: tu poses une bonne question je t'avoue que je ne comprends pas non plus

5E : Je pense pas que ce soit possible d'utiliser un Cell Elisa puisque'il repose sur la présence d'un Ag membranaire, mais ici toutes les molécules sont en suspension une fois sécrétées

7B: Je pense que c'est bien pour ça, pas besoin de complémentation puisqu'elle fonctionne déjà très bien seule !

12D: peut-être qu'il joue sur le terme "traité" ? en soi la maladie est toujours là mais en n'apportant plus de tyrosine on empeche les problèmes liés à son métabolisme, alors qu'un médicament, même si la prise doit être quotidienne, permettrait de pallier le problème de métabolisation

13E : J'ai bloqué sur cet item alors j'attends de voir al réponse de quelqu'un d'autre  

[Polochon]

Salut @Emma-8827 !!  

 

3C : @léléGT a raison, je complète juste un peu sa réponse. Ici on ne veut pas identifier la protéine contre laquelle sont dirigés les auto-Ac présents dans le sérum du patient, on veut juste savoir s’l y en a. Du coup en faisant un dot blot avec ton extrait protéique total d’épiderme, tu vas pouvoir faire précipiter les potentiels auto-Ac présents dans le sérum du patient s’ils sont dirigés contre une des protéines de l’épiderme. Tu suis ?

 

4 et 5 : un autre tuteur plus compétant que moi en immuno va bientot te répondre haha

 

7B : Oui c’est bien ca 

 

12D : je t’invite à regarder ce post répondu par notre cher RM Recherche @Bilskur

https://forum.tutoweb.org/topic/28931-r2015-q12/?do=findComment&comment=155663

 

13E : attention elle est fausse ! Tu vois qu’en traitant les hépatocytes par l’AHG, cela induit une coupure des caspases. Cela induit donc une activation de ces caspases qui sont des Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase c'est-à-dire des protéines qui pour s’activer se clivent après un Aspartate si la séquence en amont possède une Cystéine. s'il y a un site catalytique contenant une Cystéine (qui peut etre en 5' ou en 3').

Tu auras donc deux fragments de caspases :  N-ter----------Asp  contenant la partie N-ter de la caspase, et ------------C-ter contenant la partie C-ter de la caspase.

Or dans l’énoncé on te dit que l’Ac utilisé pour révéler la caspase est dirigé contre sa partie C-ter. Le fragment de 35kDa révélé par Western Blot après action de l’AHG correspond donc au fragment ------------C-ter contenant la partie C-ter de la caspase. L’Aspartate dont nous connaissant l’existence est situé sur le fragment correspondant à la partie N-ter de la caspase et non la partie C-ter. On n’a donc pas d’information sur la présence d’un potentiel Aspartate sur la partie C-ter du fragment. L'item est donc faux.

J’ai fait un gros pavé pour mon explication, n’hésite pas à me dire si c’est pas clair ^^.

 

Voila, j'espère que c'est plus clair !! Bon courage pour la suite des révisions 

Edited May 5, 2019 by Polochon

[Reïner]

Salut @Emma-8827

 

Il y a 1 heure, Emma-8827 a dit :

QCM4D : si l’épitope reconnu par AC1 est absent de la P-mat, pourquoi est-ce qu’en immunotransfert AC1 reconnaît P avant et après traitement par la furine ?

 

dans l'énoncé du 4 on te dit que la forme mature est exprimée au niveau de la membrane plasmique et on te dit en suivant que le marquage avec l'Ac1 ne met en évidence qu'un signal cytosolique... ça veut dire que la séquence de 40kda reconnue par l'ac1 est le résidu du clivage protéolytique par la furine dans le golgi  et que la forme mature ( reconnue par l'As et l'Ac2 ) est la forme de 160kDa qui va transiter jusqu'à la membrane pour exercer sa fonction donc l'Ac1 reconnait un épitoge séquentiel présent sur le prépeptide mais absent sur la protéine mature     

Edited May 3, 2019 by Reiner

[Theomérase]

Salut !!

Je viens compléter les réponses de @Polochon !

pour la 4D : après l'action de la furine, on voit qu'il reste avec L'AS une bande de 160kDa et une autre de 40kDa. Sachant que la bande de Pré-P est de 200kDa on peut déduire que la maturation consiste en un clivage de la protéine aboutissant à la création de 2 protéines et seulement une d'entre elles sera P-mat !! Vu que l'AC1 ne reconnaît que la forme "immature" de la protéine P (marquage uniquement cytoplasmique en IF, or la proteine mature n'est exprime qu'au niveau de la membrane) on peut en deduire que la protéine de 40kDa n'est qu'un résidu du clivage de Pre-P et que P-mat correspond à la protéine de 160 kDa qui n'est donc pas reconnue par l'AC1

Pour la 5E : je rejoins l'avis de @léléGT

Le cell-ELISA ne marche que pour les Ag membranaire, ici le TNF-alpha est seulement sécrété et ne pourra pas être reconnue à la surface des cellules 

Voilà, n'hésites pas à me dire si il reste des choses que tu ne comprends pas

[Emma-8827]

46 minutes ago, Polochon said:

13E : attention elle est fausse ! Tu vois qu’en traitant les hépatocytes par l’AHG, cela induit une coupure des caspases. Cela induit donc une activation de ces caspases qui sont des Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase c'est-à-dire des protéines qui pour s’activer se clivent après un Aspartate si la séquence en amont possède une Cystéine.

Tu auras donc deux fragments de caspases :  N-ter---Cys-------Asp  contenant la partie N-ter de la caspase, et ------------C-ter contenant la partie C-ter de la caspase.

Or dans l’énoncé on te dit que l’Ac utilisé pour révéler la caspase est dirigé contre sa partie C-ter. Le fragment de 35kDa révélé par Western Blot après action de l’AHG correspond donc au fragment ------------C-ter contenant la partie C-ter de la caspase. L’Aspartate dont nous connaissant l’existence est situé sur le fragment correspondant à la partie N-ter de la caspase et non la partie C-ter. On n’a donc pas d’information sur la présence d’un potentiel Aspartate sur la partie C-ter du fragment. L'item est donc faux.

Waouh. J'applaudis Donc est-ce que c'est possible qu'il y ait des Asp en C-ter ? (même si dans ce cas ça ne change rien à l'item qui est toujours faux) Ou est-ce qu'il ne peut absolument pas y en avoir ? Parce que comme la caspase se clive après un Asp... s'il y a un Asp elle va se cliver à nouveau, donc cette partie-là va se détacher du C-ter pour donner par exemple N-ter---Cys-------Asp et séparément ---Asp--- puis ---------C-ter ? En gros ce que je me demande c'est si la coupure est systématique après chaque Asp ou juste après celui qui est juste après le site comportant la Cystéine ?

 

27 minutes ago, Reiner said:

dans l'énoncé du 4 on te dit que la forme mature est exprimée au niveau de la membrane plasmique et on te dit en suivant que le marquage avec l'Ac1 ne met en évidence qu'un signal cytosolique... ça veut dire que la séquence de 40kda reconnue par l'ac1 est le résidu du clivage protéolytique par la furine dans le golgi  et que la forme mature ( reconnue par l'As et l'Ac2 ) est la forme de 160kDa qui va transiter jusqu'à la membrane pour exercer sa fonction donc l'Ac1 reconnait un épitoge séquentiel présent sur le prépeptide mais absent sur la protéine mature    

Là aussi c'est du génie... j'y avais pas du tout pensé... merciii ! 

7 minutes ago, Theomérase said:

(marquage uniquement cytoplasmique en IF, or la proteine mature n'est exprime qu'au niveau de la membrane)

Je crois que c'est cette partie-là que j'avais oublié de prendre en compte

Merci merci !! Ca me semble clair maintenant

 

9 minutes ago, Theomérase said:

Le cell-ELISA ne marche que pour les Ag membranaire, ici le TNF-alpha est seulement sécrété et ne pourra pas être reconnue à la surface des cellules 

Pff... Cell-ELISA c'est pour les Ag membranaires, et ELISpot c'est pour la numération de cellules... les noms pas du tout contre-intuitifs

Je crois que j'ai vu dans le référencement des items résolus que par contre un dot blot ça marcherait ? Puisque l'IFN peut être considéré comme l'Ag

[Theomérase]

32 minutes ago, Emma-8827 said:

Je crois que j'ai vu dans le référencement des items résolus que par contre un dot blot ça marcherait ? Puisque l'IFN peut être considéré comme l'Ag

Alors techniquement oui mais l'item serait formulé différemment, il faudrait qu'on récupère le surnageant des lymphocytes T qu'on a mis en présence de D et ensuite on effectue un Dotblot à partir du surnageant des LT et d'anticorps anti-TNF

 

Et pour ce qui est des clivages avec les caspases, la caspase ne coupe QUE sur un site qui présente à la fois la cysteine et l'aspartate , si on a que l'aspartate sans cysteine on n'aura pas de clivage ! 

[Bilskur]

Bonjour  

Juste une petite correction sur ce qui a été dit à propos des caspases, sinon tout le reste est nickel

 

Comme dit précédemment, ce sont des cystéinyl aspatate-spécifique protéinases. 

Ce qui se décompose en deux : cystéinyl protéinases et aspartate spécifique : 

Cystéinyl transférase signifie qu'il y a une cystéine dans le site catalytique de la caspase qui est essentielle. 

Et aspartate spécifique signifie que la procaspase se coupe après des aspartates  

 

Mais les deux fonctions ne sont pas reliées en tant que tel, du coup dans l'exemple ici, l'item est bel est bien faux pour la raison donnée par @Polochon, à savoir : 

Le 03/05/2019 à 12:18, Polochon a dit :

Tu auras donc deux fragments de caspases :  N-ter---Cys-------Asp  contenant la partie N-ter de la caspase, et ------------C-ter contenant la partie C-ter de la caspase.

Or dans l’énoncé on te dit que l’Ac utilisé pour révéler la caspase est dirigé contre sa partie C-ter. Le fragment de 35kDa révélé par Western Blot après action de l’AHG correspond donc au fragment ------------C-ter contenant la partie C-ter de la caspase. L’Aspartate dont nous connaissant l’existence est situé sur le fragment correspondant à la partie N-ter de la caspase et non la partie C-ter. On n’a donc pas d’information sur la présence d’un potentiel Aspartate sur la partie C-ter du fragment. L'item est donc faux.

En revanche, il est impossible d'affirmer dans lequel des deux fragments de la procaspase se trouve le site catalytique, le clivage ne dépend en aucun cas de la position de la cystéine par rapport aux asparagines  

 

J'espère que c'est clair, c'est juste une petite nuance mais ça compte quand même