Plasmide levade

[Pauu]

Salut !

 

J'aimerai bien avoir les justifications de ces items svp :

 

R2011 QCM 14 C : "Le cDNA digéré par BspDI et PstI pourra être inséré dans le plasmide préalablement digéré par NarI et PstI." vrai 

On m'avait dit que c'était 4 lettres minimum pour etre complémentaire, mais la c'est 2, ca suffit ? 

http://www.noelshack.com/2019-18-4-1556801756-c-vraie.jpg

 

TD levade

QCM 6 D fausse : http://www.noelshack.com/2019-18-4-1556801815-qcm-6-d-faux.jpg

 

QCM 15 D Vrai : http://www.noelshack.com/2019-18-4-1556801815-qcm-11-d-vraie.jpg

[Theomérase]

Salut @Pauu !

Alors pour la 14C : avec 2 lettres ça reste complémentaire en effet, il te suffit de faire la construction pour le constater 

-Du côté de pst1 pas besoin de trop réfléchir, c'est la même enzyme de restriction donc ce sera compatible quoi qu'il arrive

-de l'autre côté on va avoir BspDI (AT/CGAT) ce qui laisse ton extrémité de cDNA avec

5'CGAT...3'

3'     TA...5'

or sur le plasmide NarI  (GG/CGCC) va faire une ouverture comme cela : 

5'....GG       CGCC....3'

3'....CCGC       GG....5'

sachant que la seule partie qui va rester après le clivage par les 2 enzymes sera celle de gauche, l'insertion se fera comme ça :

5'....GG        CGAT....3'

3'....CCGC        TA....5'

(A gauche l'extrémité du plasmide, à droite l'extrémité de l'ADNc)

Donc meme avec seulement 2 lettres ça reste complémentaire, en réalité les seules lettres intéressantes sont celle du milieu, d'où la technique de mettre une deuxième barre de sorte à avoir le même nombre de lettre des 2 côtés ( exemple : AT/CG/AT et GG/CG/CC) on regarde les lettres du milieu et si ce sont les mêmes, alors c'est complémentaire et l'insertion est possible. 

Déso pour l'explication longue c'est pas facile à expliquer par écrit haha

 

pour la 6D : 

quand tu vas intégrer ton ADNc dans le plasmide digéré par taqI, ta séquence ne sera plus exactement la même : tu vas couper avec taqI et ton plasmide sera ouvert comme ceci (j'écris qu'un seul brin pour aller plus vite) :

5'...T   CGA...3'

 

D'autre part ton ADNc aura ces extrémités :

5' CGAT.............GT 3' 

 

Donc après insertion tu obtiens ceci :

5'....T    CGAT..............GT    CGA....3'

Or si tu tentes de redécouper ce plasmide avec les enzymes de restriction ClaI (AT/CGAT) Et AccI (GT/CGAT) Tu vois qu'il va manquer une lettre du site de restriction de chaque côté, on est donc pas sur de pouvoir le redécouper. On aurait pu en revanche redécouper en utilisant TaqI étant donné que cette enzyme est moins contraignante (T/CGA)

 

Et enfin pour la 15D : (tu as envoyé le qcm11, c'est bien celui pour lequel tu voulais une explication ?)

Pour celui la je te renvois à la technique que j'ai envoyé plus haut :

 

-d'un côté on va avoir 

ClaI : AT/CG/AT 

Qui va être compatible avec NarI : GG/CG/CC 

 

- De l'autre on aura 

SalI : G/TCGA/C

compatible avec XhoI : C/TCGA/G

 

Voilà un bon pavé si jamais quelque chose n'est pas clair n'hésite pas à me demander ! Et bon courage pour les révisions !!!

 

[Pauu]

Oui tqt, c'est juste qu'un tuteur m'avait dit qu'il fallait plus de 2 lettres minimum compatibles ! Et en général c'était toujours le cas, du coup je preferai etre sur 

Et niquel pour les explications merci @Theomérase !