ELISpot

[Jackjack]

Bonjour ! 

Je ne comprends pas très bien comment on peut quantifier le nombre de cellules sécrétrices dans la technique ELISpot. D'après le protocole, les cellules sécrètent des Ag et ce sont eux qui sont marqués. Donc je ne comprends pas comment on peut, à partir de là, en déduire le nombre de cellules car je suppose qu'une cellule ne sécrète pas qu'un seul Ag. 

Est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer ? 

Merci d'avance 

_{(il y avait déjà un sujet un peu comme ça sur le forum mais j'ai pas trop compris l'explication désolé si ça fait doublon)}

 

[jpmeao]

helloooo!!

 

alors en ELISpot tu vas mettre au fond d'un milieu de culture des Ag, puis tu vas disposer ton milieu avec tes cellules dedans. En fait, elles font sécréter les Anticorps contre les Ag, et à partir de là tu vas pouvoir révéler les Ac.

Concernant les méthodes de révélation, je ne suis pas sûre de toutes les connaître, mais en tout cas tu vas pouvoir utiliser un Ac secondaire couplé à une protéine luminescente ou radioactive. Lorsque cet Ac secondaire va se fixer, il va émettre un signal.

Ensuite, tu vas pouvoir repérer des plages de révélation, en fait chaque spot correspond à l'endroit où une cellule a sécrétée des Ac primaires contre les Ag du milieu. Tu comprends ? Tu vas pouvoir alors compter le nombre de points de ton milieu de culture.

Edited March 15, 2019 by jpmeao

[Jackjack]

Ah ok merci beaucoup ça règle mon problème de comptage par contre moi j'avais compris que c'était des Ac qui étaient fixés dans le milieu de culture et que les cellules sécrétaient des Ag qui étaient révélés par des Ac spé couplés à un fluorochrome ou autre. Je sais pas si j'ai été très claire 

[Reïner]

Coucou @Jackjack

 

il y a 6 minutes, Jackjack a dit :

Ah ok merci beaucoup ça règle mon problème de comptage par contre moi j'avais compris que c'était des Ac qui étaient fixés dans le milieu de culture et que les cellules sécrétaient des Ag qui étaient révélés par des Ac spé couplés à un fluorochrome ou autre. Je sais pas si j'ai été très claire 

Les deux fonctionnent

Si tu veux révéler des cellules sécrétrices d'Ac , tu fixes des Ag au fond ta boite de pétri et tu utilises un ELISA indirect

 Si tu veux révéler des cellules sécrétrices d'Ag , tu fixes des Ac au fond ta boite de pétri et tu utilises un ELISA sandwich

Edited March 15, 2019 by Reiner

[Jackjack]

Ah oui c'est vrai j'ai complètement zapper, le prof en avait parlé mais j'ai oublié de le noter merci @Reiner _{j'adore ton GIF btw il est bcp trop mim's}