Sakamain Posted March 6, 2019 Share Posted March 6, 2019 Salut salut, (Alors déjà un grand merci d'avance à la/ les personnes qui prendront le temps de tout lire/ répondre à mes quelques questions) QCM 3 B faux http://www.noelshack.com/2019-10-3-1551869603-eafrgdfd.gif QCM 5 A - B faux http://www.noelshack.com/2019-10-3-1551870467-tfjgh.gif QCM 8 D - E http://www.noelshack.com/2019-10-3-1551870986-jb.gif D. La structure de la transducine est αβ2γ (faux) E. La structure de la transducine est αβγ. (vrai) QCM 11 C vrai "la structure d'une protéine formée de 2 sous-unités identiques a de 11 kDa et 2 sous-unités identiques b de 36 kDa, toutes associées par des liaisons non covalentes. On précise par ailleurs que chacune de ces sous-unités est formée d'une seule chaîne peptidique." Profil : http://www.noelshack.com/2019-10-3-1551871348-refrg.gif Hors si on travaille dans des conditions non réductrices on a la protéine sous forme native cad 94 kDa non ? QCM 23 D vrai http://www.noelshack.com/2019-10-3-1551872466-gcfhgvjb.gif "Le KD de la liaison de la vasopressine aux cellules tubulaires est voisin de 0,5 nM." Je n'arrive pas à calculer ce foutu KD, je sais que c'est censé être évident mais je retombe toujours sur 40 en utilisant la formule KD=[L] à 1/2 de la saturation = 80/2 = 40 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution aymericz Posted March 6, 2019 Solution Share Posted March 6, 2019 Salut @Sakamain, -3B: Tu as utilisé un anticorps anti-haptoglobine pour révéler ton WB donc tu ne vois que la bande correspondant à l'haptoglobine ou à des réactions croisées. Donc tu ne peux pas savoir si il y a d'autres protéines ou pas (mais tu te doutes bien qu'une cellule ne produit pas qu'un seul type de protéines), d'ailleurs si tu révélait ton SDS-PAGE au bleu de Coomassie tu verrais plein d'autres bandes correspondant aux autres protéines produites! -5A: La d-thymidine ne se lie pas à l'EGFR! Tu ne peux donc pas parler d'affinité. En fait la d-thymidine s'incorpore à l'ADN, donc la figure 1 te montre qu'en présence d'EGF tu as incorporation de thymidine donc synthèse d'ADN, mais pas de rapport avec la liaison sur l'EGFR. -5B: Comme je viens de le dire, la thymidine radioactive marque la synthèse d'ADN, pas la transcription, puisqu'elle n'utilise pas de thymidine mais des uraciles! -8D/E:En gel filtration (non-dénaturant) tu vois que le PM de la transducine est inférieure à 10^5 Da donc je te le fais à 90kDa. Ensuite en SDS-PAGE(dénaturant) tu vois que alpha=40kD beta=35kD et gamma=10kD TRES approximativement, donc tu vois que la seule solution c'est de faire alpha+beta+gamma=40+35+10=85 donc vu que t'as approximé beaucoup de choses ça colle. Par contre alpha+2beta+gamma=40+70+10= 120= supérieur à 10^5 alors que tu avais clairement vu que c'était inférieur. -11C: liaisons non-covalentes=détruites en conditions DENATURANTES comme en présence de SDS liaisons covalntes type thioester via cystéines=détruites en conditions REDUCTRICES comme en présence de mercaptoéthanol Donc là tu es en SDSPAGE=dénaturants mais non réducteur donc tu casses les liaisons de faible énergie qui relient tes s-u de 36 et 11kD donc tu as bien 1 bande à 36 et une bande à11! -23D: Tu n'as que les liaison totales et non-spécifiques or pour calculer Kd tu veux la spécifique. Tu vois qu'à partir de 2 nM en abscisse ou 80fm en ordonnée, la hauteur gagnée par la totale est égale à la hauteur gagnée par la non-spé. Donc en fait ta liaison max est pour une concentration de 2nM, après ta courbe spécifique stagne à 80 en ordonnée. Donc pour calculer le Kd tu prends la moitié de liaison max soit 80/2=40 et là tu regardes l'abscisse et tu trouves 0.5nM! N'hésites pas si quelque chose n'est pas clair, bon courage ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sakamain Posted March 6, 2019 Author Share Posted March 6, 2019 @aymericz merciii Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Glouglou Posted March 10, 2019 Share Posted March 10, 2019 Salut! j'ai du mal avec la 3B). si on regarde la bande A, on se "doute" que la MM de la protéine est de 85KDa comme le précisait le QCM2 précedemment (il est dit que les qcm 2 et 3 sont liés). Et 85 KDa correspond à l'haptoglobine. Donc j'aurais bien mis la B vraie. est ce qu'il faut la compter fausse par le fait d' approximer la MM en la lisant (sur la piste A)? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sakamain Posted March 10, 2019 Author Share Posted March 10, 2019 coucou @Glouglou ! Pour la 3B on demande pas le PM de la protéine mais plutôt si c'était le seul type de protéine produit par les hépatocytes. Tu as peut être mal lu la question ou tu t'es trompé d'item ? + Sinon pour la justification la réponse de notre cher RM est nickel Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Glouglou Posted March 10, 2019 Share Posted March 10, 2019 @Sakamain merci pour ta réponse il y a 1 minute, Sakamain a dit : on demande pas le PM de la protéine mais plutôt si c'était le seul type de protéine produit par les hépatocytes Justement, je me suis dit, si on produit plusieurs types de protéines, on doit avoir une MM plus importante que celle qui est lue et en lisant, je vois une MM de 85 kda donc je me dit qu'il n'y a bien qu'un seul type de protéine produit et qui est l'haptoglobine car sa MM est de 85 kda. Si on avait d'autres protéines produites on aurait dû avoir une MM plus importante.. Non? voilà mon souci l Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sakamain Posted March 10, 2019 Author Share Posted March 10, 2019 ah oui je vois ta question, et enfait non, parce que l'astuce c'est qu'on utilise qu'un seul type d'anticorps contre un seul type de protéine, c'est comme mettons dans les fosses abyssales dans les océans, tu vois que le poisson avec la petite lumière #nemo mais ça veut pas dire que y en a pas d'autres, juste qu'ils sont pas révélés aux yeux de tous, c'est pas parce qu'on voit pas que y a pas. Là le fait d'utiliser qu'un seul Ac c'est hyper discriminant. Tu vois ce que je veux dire ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Glouglou Posted March 10, 2019 Share Posted March 10, 2019 (edited) il y a une heure, Sakamain a dit : Là le fait d'utiliser qu'un seul Ac c'est hyper discriminant. @Sakamain Justement, pourquoi si c'est hyperdiscréminant on ne peut avoir que l'haptoglobine? x) En fait l'haptoglobine serait une "sous classe" de la classe de protéine reconnu par l'Ac? Comment on en arrive à cette conclusion? : c'est le fait qu'un Ac reconnaisse un type général de protéines et donc, identifie les sous classes de cette classe générale de protéine? Edited March 10, 2019 by Glouglou Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sakamain Posted March 10, 2019 Author Share Posted March 10, 2019 un seul type de protéine = haptoglobine = on voit que elle sur le profil = hyperdiscriminant je sais pas comment te l'expliquer autrement, demande au RM sinon :// Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Glouglou Posted March 10, 2019 Share Posted March 10, 2019 @Sakamain D'acc, merci bp pour ton aide en tout cas Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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