LauLAbricot Posted February 24, 2019 Posted February 24, 2019 Bonsoir ! En ce qui concerne la méthode multicouche, Dr Nogueira a dit que celle-ci était très utile lorsqu'on avait 50 dosages à faire par exemple, mais concrètement je ne vois pas en quoi cela l'est plus que la méthode directe... D'ailleurs je ne vois pas ce que celle-ci apporte de plus, si ce n'est une amplification du signal, par rapport à la méthode directe. Autre question : au niveau du système peroxydase/anti-peroxydase, quel élément porte le signal ? La peroxydase logée dans le complexe PAP ? Merci d'avance ! Quote
NicoLqe Posted February 25, 2019 Posted February 25, 2019 Salut ! Alors ta première question je ne peux pas y répondre parce que je ne vois pas non plus... Après retient simplement que ça permet d'amplifier le signal, c'est amplement suffisant pour les qcms à ce niveau là Pour le système peroxydase/anti-peroxydase : Ne te tracasse pas trop non plus pour ça. En fait tu as une enzyme couplée à ton anticorps (voir schéma du poly), tu vas rajouter le substrat de ton enzyme dans le milieu, et tu visualiseras ensuite les endroits où ton substrat a été utilisé, donc oui le signal c'est en quelques sortes l'enzyme. Je le vois comme ça en tout cas ^^ Voilà, bonne journée Quote
Solution aymericz Posted February 25, 2019 Solution Posted February 25, 2019 Salut @LaurineL, Il y a 13 heures, LaurineL a dit : En ce qui concerne la méthode multicouche, Dr Nogueira a dit que celle-ci était très utile lorsqu'on avait 50 dosages à faire par exemple, mais concrètement je ne vois pas en quoi cela l'est plus que la méthode directe... D'ailleurs je ne vois pas ce que celle-ci apporte de plus, si ce n'est une amplification du signal, par rapport à la méthode directe. Quand tu as des dosages de plusieurs protéines différentes à faire c'est plus facile et moins cher de produire des Ac monoclonaux contre tes protéines et produire des Ac secondaires anti-Ac que tu couples à une molécule signal que de produire des anticorps monoclonaux contre tes protéines d'intérêt, que tu devras chacun coupler à une molécule signal dns le cadre de la méthode directe! Si tu as 4 dosages ça te fait économiser 3 couplages! Est-ce que c'est clair ? Il y a 13 heures, LaurineL a dit : au niveau du système peroxydase/anti-peroxydase, quel élément porte le signal ? La peroxydase logée dans le complexe PAP ? C'est bien sur l'enzyme qui est à l'origine du signal (elle ne le porte pas hein) quand elle transforme le substrat en un produit coloré; l'intérêt de cette méthode c'est que l'enzyme n'est pas couplée aux Ac, puisque comme je viens de l'expliquer coupler des Ac c'est chiant et c'est cher. Du coup, avec les 2 Ac anti-peroxydases, l'enzyme ne s'accroche et ne reste sous forme de complexe PAP que là où sont les anticorps, c'est à dire l'endroit où les anticorps primaires ont reconnu leur cible! Quote
aymericz Posted February 26, 2019 Posted February 26, 2019 Salut @LaurineL, Si tu as les réponses à tes questions, penses à utiliser la fonction Meilleure Réponse, merci! Bonne journée ! Quote
LauLAbricot Posted March 6, 2019 Author Posted March 6, 2019 @aymericz @NicoLqe merci pour vos réponses ! Belle journée ! Quote
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