Ancien Responsable Matière Soleneuh Posted February 23, 2019 Ancien Responsable Matière Share Posted February 23, 2019 Hey ! j'ai énormément de mal avec les qcms de "biotechnologies immunologiques" alors j'aurais plusieurs questions... * tout d'abord je n'ai pas très bien compris la différence entre immunoprécipitation et immunotransfert J'ai compris que l'immunotransfert se fait en conditions dénaturantes et pas l'immunoprécitation mais après c'est très flou et j'ai l'impression que dans le poly il y a beaucoup beaucoup d'infos que doit-on retenir concernant ces 2 techniques pour le concours ? *Ensuite avec le qcm 14 du poly : Révélation ABC *item B : Comment on le sait ? c'est parce qu'en immunotransfert ça détruit les épitopes cnformationnels du coup forcément l'AC 1 est conformationnel puisqu'il n'est pas retrouvé sur la bande ? *item C : pareil comment on le sait ? c'est à cause de l'immudodétection je me doute mais alors là pourquoi ? j'en sais rien Ensuite l'item E de ce qcm: pourquoi la E est vraie ? en quoi ça permetrait de les trier ? parce que les LB vont sécreter des anticorps anti adrétinine ? mais ça va pas les fixer si ? via leur Ac mbr ? je suis perdue Si quelqu'un pouvait m'aider, ne serait-ce que pour une de mes questions ce serait vraiment génial Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution aymericz Posted February 24, 2019 Solution Share Posted February 24, 2019 Salut @solenefdo, En fait l'immunotransfert c'est un western blot donc en gros tu sépares des protéines selon leur taille en conditions denaturantes. L'immunoprécipitation c'est autre chose, le but c'est de séparer ta protéine d'intérêt d'un extrait cellulaire par exemple, mais à la fin tu veux avoir ta protéine. En co-immunoprecipitation c'est la même chose sauf qu'en plus tu veux étudier les autres protéines liées à ta protéine d'intérêt. Pratiquement tu prends un anticorps contre ta protéine d'intérêt, tu le couples à un truc lourd, tu centrifuges et dans le culot tu as ta protéine. Typiquement, tu peux réaliser une co-Ip, et avec les protéines de cette co-Ip tu réalises un WB (=immunotransfert) pour étudier les protéines liées ou pas un ton récepteur en présence de tel ou tel ligand, c'est clair ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Soleneuh Posted February 24, 2019 Author Ancien Responsable Matière Share Posted February 24, 2019 @aymericz merci beaucoup pour ta réponse !! oui je pense avoir mieux compris maintenant : *en immunoprécipitation on a un mélange de protéines, et nous on cherche à en récupérer une en particulier, donc on va utiliser un Ac anti- protéine d'intéret avec accroché dessus un truc lourd pour pouvoir récupérer l'ensemble anticorps-protéine d'intéret avec une centrifugation, et à la fin on a isolé notre protéine. *en co-immunoprécipitaion c'est la même chose mais en isolant plusieurs protéines (liées à la protéine d'intéret de départ), du coup on isole plusieurs protéines d'un coup. *en immunotransfert = Western blot, on va faire une séparation du résultat de notre co-immunoprécipitation pour séparer toutes nos protéines selon leur taille, et ça se fait avec du SDS donc en conditions dénaturantes (comme on avait vu au S1 en biomol ou en génome) c'est ça ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
aymericz Posted February 24, 2019 Share Posted February 24, 2019 Il y a 16 heures, solenefdo a dit : item B : Comment on le sait ? c'est parce qu'en immunotransfert ça détruit les épitopes cnformationnels du coup forcément l'AC 1 est conformationnel puisqu'il n'est pas retrouvé sur la bande ? En conditions denaturantes si l'anticorps reconnaît c'est un épitope séquentiel et on sait que l'AC 1 reconnaît bien la protéine donc par déduction il reconnaît un épitope conformationnel. Il y a 16 heures, solenefdo a dit : item C : pareil comment on le sait ? c'est à cause de l'immudodétection je me doute mais alors là pourquoi ? j'en sais rien On sait que Ac1=conformationnel donc quand on fait l'Ip ça isole bien la protéine, c'est normal,mais on est pas sur une cellule entière mais sur un extrait cellulaire donc ça ne répond pas à notre question. Par contre en immunofluorescence, tu cibles des cellules entières donc si ça reconnaît ton épitope est extra cellulaire et si ça reconnaît pas c'est qu'il est intra cellulaire. Il me semble quand même que le cours été modifié depuis puisque tu peux perméabiliser tes cellules pour faire de l'IF sur des prots intracellulaires. @solenefdo c'est exactement ça Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Soleneuh Posted February 24, 2019 Author Ancien Responsable Matière Share Posted February 24, 2019 Oki merci nikel pour les réponses des items c'est bon j'ai compris Je vérifierai si l'immunofluorescence peut se faire sur des protéines intracR mais là pour l'énoncé je pense que ça aurait été précisé, J'ai tout compris merci beaucoup c'est génial Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
aymericz Posted February 24, 2019 Share Posted February 24, 2019 @solenefdo Il y a 17 heures, solenefdo a dit : pourquoi la E est vraie ? en quoi ça permetrait de les trier ? parce que les LB vont sécreter des anticorps anti adrétinine ? mais ça va pas les fixer si ? via leur Ac mbr ? je suis perdue Elle est effectivement vraie: tu peux trier des LB par la méthode de ELISA Cell. En fait tu prends une plaque recouverte de l'Ag d'intérêt (c'est ce dont tu disposes dans ce QCM) et ensuite tu balances tes LB dessus, tu attends qu'ils aient le temps de sécréter un peu, tu laves, et tu envoies des anticorps secondaires anti-anticorps couplés à une enzyme, puis tu ajoutes le substrat. Et bien là où il y avait des LB produisant des anticorps spécifiques de l'Ag d'intérêt il y a des anticorps accrochés à la plaque, donc il y a production de produit coloré par l'enzyme et tu peux ainsi discriminer les LB. Je pense que j'ai répondu à toutes tes questions, n'hésites pas si autre chose te tracasse ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Soleneuh Posted February 24, 2019 Author Ancien Responsable Matière Share Posted February 24, 2019 il y a 8 minutes, aymericz a dit : Elle est effectivement vraie: tu peux trier des LB par la méthode de ELISA Cell. En fait tu prends une plaque recouverte de l'Ag d'intérêt (c'est ce dont tu disposes dans ce QCM) et ensuite tu balances tes LB dessus, tu attends qu'ils aient le temps de sécréter un peu, tu laves, et tu envoies des anticorps secondaires anti-anticorps couplés à une enzyme, puis tu ajoutes le substrat. Et bien là où il y avait des LB produisant des anticorps spécifiques de l'Ag d'intérêt il y a des anticorps accrochés à la plaque, donc il y a production de produit coloré par l'enzyme et tu peux ainsi discriminer les LB. Je pense que j'ai répondu à toutes tes questions, n'hésites pas si autre chose te tracasse ! oooook j'ai pigé merci beaucoup, du coup plus des plasmocytes que des LB pour qu'ils puissent sécreter des Ac pour le coup, merci beaucoup Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
aymericz Posted February 24, 2019 Share Posted February 24, 2019 Bonsoir @solenefdo, Attention j'ai fait une petite erreur, la technique pour discriminer les plasmocytes c'est l'ELISpot pas le Cell-ELISA qui lui permet de détecter des Ag membranaires. Désolé ! Bonne soirée Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Soleneuh Posted February 24, 2019 Author Ancien Responsable Matière Share Posted February 24, 2019 il y a 7 minutes, aymericz a dit : Bonsoir @solenefdo, Attention j'ai fait une petite erreur, la technique pour discriminer les plasmocytes c'est l'ELISpot pas le Cell-ELISA qui lui permet de détecter des Ag membranaires. Désolé ! Bonne soirée ok je prends note merci ^-^ bonne soirée Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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