Aspirine48 Posted April 7, 2014 Share Posted April 7, 2014 Salut Je m'embrouille un peu (bcp) ds l'ELISPOT... Le cours: - Il permet de dénombrer les cellules sécrétrices d'une molécule x donnée dans un mélange cellulaire complexe. 1- Recouvrir les puits de culture d'AcM spécifique de l'antigène x (a1 : Ac de capture) 2- Ajouter une quantité connue de cellules hétérogènes en suspension 3- Cultiver : certaines cellules sécrètent la molécule analysée dans leur environnement immédiat 4- dans le milieu de culture, l'antigène x se fixe à a1 5- Après lavage des puits (élimination des cellules), un second anticorps (a2) marqué par une enzyme et spécifique de l'antigène x est ajouté 6- Après lavage, le chromogène est ajouté. Sa modification enzymatique induit sa précipitation colorée sur le lieu de la réaction enzymatique 7- Des spots colorés peuvent être détectés et correspondent à l'emplacement de cellules sécrétrices de x. Je visualise pas du tout pourquoi il y a ces Ag?! d'où ils sortent? est-ce qu'on les a ajoutés? ou bien est-ce que molécule x = Ag x? On veut savoir combien on a de cell sécrétrice de X, donc au fond du boîte de pétri on met des Ac spé de X, on ajoute des cell, certaines vont sécréter X, pourquoi c'est pas ce X qui va aller se fixer sur l'Ac? Ou bien est-ce que X va se fixer sur Ag qui va se fixer sur Ac (mais à ce moment là les Ag X ont été ajoutés, ils viennent bien de qlq part?)... Après, on marque l'antigène X, et là ça a vrmt plus de sens ds ma tête (j'ai la très mauvaise impression que je complique un truc super simple et que je vais me sentir bien bête après), si 1 spot = 1 Ag (Ag qui vole une place à X) alors plus il y a de point MOINS il y a de X, donc peu de cell sécrétrice... sauf que justement les spots colorés correspondent à l'emplacement de cellules sécrétrices de x.... DONC, est-ce que je délire complètemt..? est-ce qu'en fait les X se fixent sur des Ag qui ont été ajoutés (et c'est tllmt évident qu'ils sont ajoutés que c'est mm pas la peine de le préciser et je ss totalement débile de pas avoir compris toute seule)? ou tout simplement par "molécule X" (ds la 1ère ligne) le Pr entend Ag X (après tout, molécule ça peut être n'importe quoi, pas de raison pr que ça soit un Ag -oui, je cherche des arguments pr me convaincre que j'ai pas -4 de QI) HEEELP (dsl pr le super long post...) Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution cycyrkt Posted April 12, 2014 Solution Share Posted April 12, 2014 Salut, Désolé pour la réponse tardive, mais après une looooooongue réflexion (parce que du coup, j'étais plus sure de ma réponse.....), les molecules X sont les antigènes X (sur le diapo, le prof a cité des cytokines, des anticorps), d'où la reconnaissance par les anticorps de capture et ceux de détection, et d'où le fait que un point = une cellule sécretrice! Bon ben, j'espère que c'est pas trop tard et que tu as compris! Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aspirine48 Posted April 12, 2014 Author Share Posted April 12, 2014 Merci bcp par ta réponse j'en étais arrivée à la même conclusion Link to comment Share on other sites More sharing options...
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