maguy Posted April 6, 2014 Share Posted April 6, 2014 Bonjour, j'ai pas bien compris cette technique, Est-ce que qq1 pourrait m'expliquer por favor Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution gaussens09 Posted April 6, 2014 Solution Share Posted April 6, 2014 Salut! Alors le test ELISA c'est une des techniques "de la mort qui tue" tellement c'est pratique (j'exagère un peu d'accord^^) Ca consiste à prendre un ensemble de petits puits dans lesquels tu fixes un ANTICORPS au fond (le même type pour chaque puit): donc en théorie s'il est bien accroché, tout ce qui s'y accrochera par la suite restera dans ton puit Ensuite tu mets dans chacun des puits un ANTIGENE (sous entendu que chaque puit contient un type d'ag différents que tu veux tester). T'attends un peu puis tu laves tes puits. Donc à ce moment tous les Ag qui ne reconnaissent pas ton Ac, ils se sont pas fixés et ils sont partis avec l'eau lors du lavage. Il ne te reste plus que les Ag reconnus et fixés par ton Ac. C'est bien gentil tout ça mais tes Ag tu les voit pas donc va falloir soit les marqués, soit rajouter un AUTRE ANTICOPRS spécifique de ton Ag mais marqué (t'obtiens un espèce de sandw chiavec un Ac non marqué au fond, l'Ag entre les deux Ac, l'Ac marqué en haut) pour les rendre visibles. Bon ça c'est le modèle de base (j'espère que j'ai été compréhensible), mais tu peux faire quelques modifications en fonction de ce que tu veux: -ton objectif c'est de trouver un Ag (dans différents tissus) t'utilise le modèle de base. Au final, les puits colorés (si tu utilises un fluorochrome) y a l'Ag les autres y a pas. Ce test n'est pas parfait (histoire de conformation,...) et il est quantitatif (ou semi je sais pas trop:/) parce qu'en théorie plus tu as de couleur plus y a d'antigène (technique avec un Ac marqué) -ton objectif c'est de quantifier un Ag (dans un surnageant,...) tu peux utiliser des Ag (les mêmes que ce que tu doses) marqués dont tu connais la quantité exact. Tu mets tes Ag marqués et non marqués dans ton puit et puis tu laves. En théorie si tu n'avais pas mis Ag non marqués, 100% de tes Ag marqués aurait été fixé par les Ac et t'aurais eu 100% de fluorescence (ou autre pour les autres marquages). Mais tu as mis des Ag non marqués donc il y a compétition!!! Donc plus tu en mets, plus ils occupent de place et plus tu perds d'Ag marqués lors du lavage (virés suite à la crise du logement au niveau des Ac;)). Ta fluorescence est donc INVERSEMENT proportionnelle à la quantité d'Ag que tu cherche à doser. -ton objectif c'est de trouver un Ac SPECIFIQUE d'un Ag (genre recherche d'Ac auto-immun dans un sérum), pas de problème tu inverses ta méthode: plutôt que de fixer un Ac tu fixes l'ANTIGENE reconnu, tu rajoutes les sérums, tu laves et tu révèles avec un autre Ac marqué dirigé contre ton Ac d'intérêt (genre un Ac qui reconnait le fragment C). Voilà, c'est un gros paquet j'avoue mais je sais pas trop si vous avez vu la même chose à maraichers et il y a plein de trucs à dire. En espérant avoir été clair, ne pas avoir fait d'erreur et t'avoir été utile:) Link to comment Share on other sites More sharing options...
maguy Posted April 6, 2014 Author Share Posted April 6, 2014 Salut, wé un gros paquet mais super bien expliqué en tout cas. Il me semble que nous on n'a pas eu autant de détails (ou alors je me suis endormie), mais ça me permet de vraiment comprendre. Merci bcp en tout cas d'avoir pris la peine de me répondre. Bon courage à toi, travail bien Link to comment Share on other sites More sharing options...
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