LauLAbricot Posted December 12, 2018 Share Posted December 12, 2018 Bonjour ! Je crois avoir compris le principe du plasmide dans le cas de vecteurs recombinants mais je ne suis pas sûre de mon raisonnement et des zones d'ombres persistent encore.. De ce que j'ai compris, le plasmide sauvage possède : - le gène de la barnase - le gène de résistance à l'ampiciline - des sites de restriction autour de la barnase Du coup s'il y a recombinaison, le gène de la barnase est remplacé par le fragment d'ADN d'intérêt. Si la coupure n'a pas eu lieu, le gène de la barnase est toujours présent, le fragment d'ADN d'intérêt n'a pas été inséré. Est-ce bien cela? Maintenant je ne comprends pas ce qu'il se passe concrètement dans un milieu de culture avec ampiciline. Pour moi, vu que dans tous les cas, le gène de résistance aux antibiotiques est toujours présent (insertion ou pas du fragment d'intérêt), tous les plasmides résisteront. Donc j'ai du mal à cerner ce qu'il faut retenir par rapport à ça. Quelqu'un aurait-il l'explication ? ^^ Merci Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Luciférine Posted December 12, 2018 Solution Share Posted December 12, 2018 (edited) Salut @LaurineL ! En fait tu fais une "double sélection". Le gène de résistance à l'ampicilline est présent dans tous les plasmides, recombinants ou sauvages. En mettant les bactéries dans un milieu avec de l'ampicilline, seules les bactéries qui ont intégré le plasmide (qu'il soit sauvage ou recombinant) vont survivre et proliférer. Le gène de la barnase, tu l'as bien compris, est présent uniquement dans les plasmides sauvages, c'est-à-dire ceux qui n'ont pas intégré l'ADNc. Quand tu digères l'ADNc et le plasmide par SgfI et PmeI, tu insère ton ADNc à la place du gène de la barnase. Ce qu'il faut comprendre, c'est que le gène de la barnase est létal (cytotoxique), c'est-à-dire que lorsqu'il est présent, la cellule ne survit pas. Les seules cellules qui survivent sont celles qui n'ont pas de gène de la barnase et donc forcément si l'ADNc s'est inséré à la place ! Donc la sélection avec la barnase permet de sélectionner les plasmides recombinants. Donc au final, tu as sélectionné les bactéries ayant intégré le plasmide grâce au gène de résistance à l'ampicilline, et tu es sûr que les colonies que tu obtiens sont des colonies recombinantes car sinon elles n'auront pas résisté à cause du gène létal de la barnase. Tu comprends ? Edited December 12, 2018 by Luciférine Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
LauLAbricot Posted December 14, 2018 Author Share Posted December 14, 2018 Parfait oui, merci beaucoup ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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