Glouglou Posted December 9, 2018 Share Posted December 9, 2018 (edited) Bonjour Tutoweb je ne comprends pas l'expérience sur les colonies bleues et blanches, je sais que ce sujet a été abordé à de multiples reprises sur tutoweb mais je ne comprends qd même rien rien rien du tout Ça fait 2 heures que je m'énerve sur mon poly devant une expérience de rien du tout Je ne comprends pas le principe: pourquoi les colonies bleues ne sont pas les colonies qui nous intéressent? Qd on obtient des colonies bleues, cela signifie hydrolyse par la béta-galactosidase et donc? cela signifie que X-GAL, qui permet de reconnaître des protéines d'intérêt, a été hydrolysée (donc détruite) et ne peut plus mettre en évidence les protéines? et cette destruction de X-GAL témoigne de l'incapacité à mettre en évidence la protéine d’intérêt...? Donc c'est la raison pour la quelle se sont les colonies blanches qui nous intéressent? comme elles n'hydrolysent pas X-GAL, celle ci n'étant pas détruite, elle permet donc de mettre en évidence des protéines d'intérêt...? En fait pourquoi les colonies blanches sont blanches? elles n'hydrolysent pas X-GAL donc n'émettent pas de lumière bleue mais pourquoi elles ne coupent pas X-GAL? (Un énooooooooooooooorme merci pour vos explications ) Edited December 9, 2018 by Glouglou Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Sakamain Posted December 9, 2018 Solution Share Posted December 9, 2018 (edited) Coucou ! Si tu regardes la diapo 223, tu verras que l'ADNc est inséré au milieu de la séquence de lacZ (qui code pour la betaGal). Donc, lorsque l'ADNc a été bien insérée ds le plasmide, la séquence codante de la BetaGal a été interrompue --> elle ne peut pas être transcrite/ traduite --> X-Gal ne peut pas être hydrolysée --> on n'aura pas de lumière bleue ! Les colonies blanches sont donc blanches parce que ne codant pas pour la BetaGal elles n’hydrolysent pas la X-Gal (petit rappel, les bactéries sont mises dans un milieu qui a de l'IPTG, de l'antibio et du X-Gal). L'ADNc a été inséré --> c'est ce qui nous intéresse, elles peuvent produire la protéine de fusion. N'hésites pas si tu as d'autres questions ! Edited December 9, 2018 by Cachka Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Glouglou Posted December 9, 2018 Author Share Posted December 9, 2018 Donc si j'ai bien compris l'insertion de l'ADNc ds les bactéries au niveau de BétaGal empêche la fabrication de la protéine (donc comme tu l'as dit , pas d'hydrolyse possible) donc 0 lumière bleue.... (Merci bp) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sakamain Posted December 9, 2018 Share Posted December 9, 2018 Oui voilà c'est ça ! (avec plaisir ) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Valou31 Posted December 10, 2018 Share Posted December 10, 2018 Rien à rajouter @Cachka ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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