Nick Translation et Random Priming

[nabaday]

Salut!

Je n'ai pas compris la différence entre la technique e Nick Translation et de random Priming... Quelqu'un pourrait m'expliquer svp ??

Merci d'avance

[Roux-carnage]

Hey!

Alors déjà ce sont 2 méthodes qui permettent de marquer des acides nucléiques déjà constitués.

 

Pour la nick translation:

 

A partir de notre fragment d'ADN db, on va faire agir:

- une endonucléase pour provoquer des cassures sur chaque brin

- une exonucléase qui va supprimer les nucléotides en commençant au niveau des cassures

- une polymérase juste après le passage de l'exonucléase. C'est à cette étape que va se faire le marquage. En effet, la polymérase va utiliser de l'ATP marqué sur le phosphate ⍺. 

 

=> Ainsi les nucléotides enlevés par l'exonucléase sont remplacés par ceux mis en place par la polymérase.

=> Par nick translation, on obtient, à partir d'un fragment d'ADN db, un seul fragment d'ADN db marqué au niveau des nucléotides à adénine (on "remplace" des nucléotides non marqués par des nucléotides marqués"

 

 

Pour le random priming:

A partir de notre fragment d'ADN db, on va:

- dénaturer le fragment

- hybrider chaque brin avec des amorces

- induire, sur chaque brin, la synthèse du brin complémentaire et anti-parallèle. La synthèse du brin néosynthétisé se fait avec de l'ATP marqué sur le phosphate ⍺.

 

=> Ainsi, on obtient au final 2 fragments d'ADN db: pour chaque fragment, un seul des 2 brins est marqué.

=> Par random priming, on obtient, à partir d'un fragment d'ADN db, 2 fragments d'ADN db marqués au niveau des nucléotides à adénine

 

[nabaday]

Ok super c'est beaucoup plus clair merci !!