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[Agatheb]

Bonjour

J'ai une petite incompréhension pour le QCM 1 de cette annale on dit dans l'énoncé qu'on purifie les IgG totaux des mecs a étudier (leurs LCR plus particuliérement) puis on fait une immunoprécipitation à partir des extraits protéiques solubles de tissus cérébral humain, on analyse et on a une protéine (Ak5) 

On nous dit aussi qu'on fait un immunotransfert et on trouve la même chose (en gros) 

C "C'est résultats vous permettent d'affirmer que les auto-anticoprs présents dans le LCR-A reconnaissent au moins un épitope conformationnel sur l'AK5." faux, correction du tat : le SDS page dénature les protéines 

mais du coup je ne comprends pas ce que vient faire l'expérience d'immunoprécipitation qui permet aussi de mettre en évidence l'Ak5 alors qu'elle n'est pas dénaturée.. 

Merci 

[Sarahbbcch]

Bonjour Agathe, ici l'immunoprécipitation à servie a purifier la protéine Ak5 à partir des extraits protéiques solubles de tissu cérébral humain et donc à la mettre en évidence. L'immunotransfert vient ensuite et va permettre de déterminer notamment le poids moléculaire de la protéine. La comparaison des poids moléculaires entre immunoprécipitation et immunotransfert va permettre de définir le(s) type(s) d'épitopes (conformationnels ou séquentiels) reconnus par les anticorps. Ici c'est faux car le poids moléculaire est identique en immunoprécipitation (non-dénaturante) et en immunotransfert (conditions dénaturantes) donc les auto-anticorps ne reconnaissent pas des épitopes conformationnels mais séquentiels. 

[sweet]

Bonjour !

 

Ducou, si j'ai bien compris : 

 

Immunoprécipitation => Conformationnel

Immunotransfert => Séquentiel

Marquage avec les 2 => Séquentiel ??? (Le séquentiel prime sur le conformationnel ?)

 

 

De plus, j'ai une autre question sur ce QCM, a propos de l'item E : Vous pouvez purifier les ag par dot blot a partir d'un extrait protéique total de cerveau"

 

Au vu de la correction du tat , je me demandais si le dot blotting pouvais permettre de purifier car il n'ya pas de migration. Mon raisonnement est-il le bon ? 

 

Merci 

Edited May 12, 2018 by sweet

[Agatheb]

dsl mais je ne vois pas trop le lien entre le fait que la protéine soit de même poids avec les 2 techniques  et que les auto-ac reconnaissent des épitopes séquentiels.. 

[Sahra]

Vaut mieux tard que jamais, j'arrive rapidement à la rescousse
Et j'espère que les épreuves de ce matin se sont bien passées pour vous 

 

Immunoprécipitation (IP) = Non dénaturant => Séquentiel ou Conformationnel 

Immunotransfert (IT) = Dénaturant => Séquentiel

Marquage avec les 2 => Séquentiel  (du coup si tu as un résultat en immunoprécipitation tu sais que ça reconnaît un épitope mais tu ne sais pas lequel, tu

fais un immunotransfert et tu es fixé si ça reconnaît, l'épitope est séquentiel).

 

Du coup, pour @Agatheb, si tu reconnais la même chose en conditions dénaturantes (IT) et non dénaturantes (IP), c'est que l'épitope reconnu n'est pas dépendant de sa conformation (puisque détruite en conditions dénaturantes) c'est donc un épitope Séquentiel.

 

Attention, parfois un épitope séquentiel n'est reconnu qu'en conditions dénaturantes c'est possible si la conformation le rendait inaccessible (déjà vu dans un qcm donc restez ouverts d'esprit ). 

 

Le dot blotting se fait en conditions dénaturantes et sans migration donc ça permet de révéler une reconnaissance Ac-Ag mais pas de purifier tu as tout à fait raison. 

 

J'espère que ça clarifie un peu, hésitez pas si vous avez des questions de dernières minutes 

Courage pour ces 2 derniers jours, le soleil vous attend! 

[Agatheb]

ok merci beaucoup!