Adpn Posted April 28, 2018 Share Posted April 28, 2018 Bonjour ! Je ne comprends pas la démarche qu'il faut avoir pour résoudre ce QCM... Merci d'avance... Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Membre d'Honneur Solution Sahra Posted May 1, 2018 Membre d'Honneur Solution Share Posted May 1, 2018 Salut Adpn! (Désolée pour l'attente) Alors comme toujours en recherche il faut avancer petit à petit grâce aux infos/figures que l'on te donne. Accroche toi, on y va! QCM 14. (Poly entraînement Protéines) D'abord on te dit qu'à pH=8,5 la protéine est exclue d'une colonne de DEAE-cellulose. Ici, il faut que tu te rappelles que ce type de colonne est chargée +, il s'agit donc d'une chromatographie d'échange d'anions. On commence par un pH très élevé pour que les protéines soient anioniques et s'accrochent à la colonne et au fur et à mesure on diminue le pH jusqu'à ce que la protéine se décroche c'est-à-dire qu'elle ne soit plus anionique (zwitterion puis cationique), c'est qu'on a atteint son pHi. Je te mets un petit schéma récap : Donc si la protéine est exclue à pH=8,5 c'est que son pHi est au moins égal à 8,5 voire même supérieur. Donc Item A FAUX. Ensuite, on te donne les résultats du gel filtration (conditions non dénaturantes), donc ta protéine dans sa globalité a un poids moléculaire de 96kDa. Maintenant en SDS-Page (dénaturant = perte conformation, rupture liaisons non covalentes), tu observes sans B-mercaptoéthanol, une seule bande à 51kDa. Or tu sais que ta protéine fait 96kDa normalement, donc là tu te dis que cette petite elle doit avoir 2 sous-unités de 51kDa pour faire approximativement tes 96kDa. Puis avec le B-mercaptoéthanol tu vois qu'il y a 2 bandes une à 32 et une à 21kDa, ce qui correspond en fait à ta bande de 51kDa divisée en 2, donc tu as ici 2 chaînes peptidiques (32kDa et 21kDa) reliées par pont disulfure et ceci x2 puisque de base y'a 2x 51kDa. Item B VRAI. J'espère que je ne t'ai pas perdu? Alors au final, tu as une protéine ayant une structure quaternaire avec 2 sous unités de 51kDa composées chacune de 2 chaînes peptidiques (32 et 21kDa) reliées par pont disulfure (=Liaisons covalentes). Item C FAUX. Enfin, on te précise que la protéine est retenue sur une colonne d'héparine-Sépharose (héparine couplée à un gel de dextrane). Là, tu dois comprendre que si la protéine est retenue, c'est qu'elle s'est accroché à l'héparine, donc la protéine a une affinité pour l'héparine. C'est une technique de purification on parle de chromatographie d'affinité (comme par exemple au S1 en génome quand tu cherchais à purifier l'ADN avec la silice, ton ADN a de l'affinité pour la silice... #GénomeEverywhere). Item D VRAI. Une enzyme c'est une protéine impliquée dans la catalyse d'une réaction chimique, ici aucune donnée n'est en lien avec cela, donc item E FAUX. J'espère que tu comprends un peu mieux, essaye de faire autant de Qcms que tu peux en Recherche c'est la clé pour avoir les automatismes et n'hésite pas à venir demander dès que quelque chose te pose problème! Courage courage, on est avec toi! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Adpn Posted May 4, 2018 Author Share Posted May 4, 2018 Oh ! Je ne m'attendais pas à tant ! Merci beaucoup d'avoir pris le temps de m'expliquer c'est tout clair maintenant !! Mais ce qui m'a le plus bloquée je pense c'est le fait que on puisse être aussi approximatifs sur les tailles des sous-unités en fait, donc je ne comprenais pas que ça puisse correspondre... Je vais continuer à m'entrainer En tout cas merci beaucoup beaucoup beaucouuuup ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Membre d'Honneur Sahra Posted May 4, 2018 Membre d'Honneur Share Posted May 4, 2018 Toujours avec plaisir! Rien (ou presque) n'est parfait en recherche, en labo tu aurais rarement des tailles super exactes comme d'ailleurs des bandes super précises... Donc ne reste pas frustrée sur de tels détails si ça reste dans la mesure du raisonnable bien sûr Allez lâche rien et n'hésite pas à repasser par ici si y'a un soucis ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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